實驗方法原理
由于小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血干細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗采用這一材料,通過前處理,低滲,固定,制片,染色等步驟制得染色體標本,可觀察到許多處于分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析。
實驗材料 小白鼠
試劑、試劑盒 秋水仙素姬姆薩染液固定液低滲液生理鹽水
儀器、耗材 天平離心機恒溫培養箱顯微鏡
實驗步驟
1.戴上帆布手套,以脫頸椎法處死小鼠,立即用剪刀剪去大腿處的皮膚和肌肉,連同關節頭一起取下兩側股骨和脛骨,剔凈其上肌肉,用2%檸檬酸鈉溶液洗凈。剪去關節頭,使其露出骨髓腔,用吸有適量2%檸檬酸鈉溶液的注射器,將針頭插入骨髓腔,將骨髓用檸檬酸鈉溶液吹洗入刻度離心管,反復洗直至骨腔變白。
2.將所得的骨髓細胞懸浮液1000r/min離心10min,吸去上清液,加0.075mol/L KCl 5~8ml,立即用吸管吹打均勻,室溫下靜置低滲25min。
3.1000r/min離心10min,去上清液,沿管壁加5~8ml甲醇-冰醋酸(3∶1)固定液,立即吹散打勻,靜置30min。
4.離心去上清液,留約0.1~0.2ml的沉淀細胞和上清液,用吸管反復輕吸混勻,制成細胞懸浮液。
5.取潔凈冰水中預冷的載玻片,稍作傾斜,用吸管吸取一滴上述細胞懸浮液,于載玻片上方適當高度滴在載玻片上,立即吹散吹勻載玻片上細胞,空氣干燥。
6.載玻片充分干燥后,用pH6.8的磷酸緩沖液按1份Giemsa原液、9份磷酸緩沖液混勻后染色。材料面向上,用染液覆蓋載玻片,染色10~15min,用流水洗去多余染液,再用吸水紙吸干多余水分,干燥后即可鏡檢。在載玻片上用石炭酸品紅染色10min左右也可。