1. 實驗原理 利用指示劑的蛋白質誤差原理,蛋白質與指示劑的離子(溴甲酚藍,四溴酚藍二酯)相結合生成復合物,引起指示劑的進一步電離,超過了尿液的緩沖能力,指示劑則發生顏色變化。顏色的深淺與蛋白質含量成正比。 2. 標本采集 2.1 標本采集前病人準備:以清晨第一次尿為宜,急診患者可隨時留取。 2.2 標本種類:新鮮尿液 2.3 標本要求:采集患者尿液標本時,盛尿液的容器必須清潔干燥,要求留取中段尿。 3. 標本儲存:從排出到檢測應在2小時內完成。如不能及時送檢或分析,應置4℃下冷藏保存,但冷藏時間不得超過6小時。 4. 標本運輸:室溫運輸。
5. 標本拒收標準:細菌,經血,白帶,精液,糞便污染標本不能作測定。
6. 試劑
6.1 試劑名稱 Combur10 TestR M
6.2 試劑廠家 德國 Roche 診斷試劑公司
6.3 包裝規格:100Test/kit
6.4 試劑盒組成:試紙條:100條
6.5 試劑儲存條件及有效期:試劑盒貯存于2-30℃條件下,可使用至試劑盒所標示有效期。
7. 儀器設備
7.1 儀器名稱:羅氏尿液分析儀
7.2 儀器廠家:Roche
7.3 儀器型號:MiditronR Junior II
7.4 儀器校準程序:在使用過程中,一般是兩周校準一次,如超過此期限,儀器會提示“Please Calibrate”(請校準)。通過測定內部參比塊,環境溫度和光學系統的改變都可被補償。當條件改變很大時,比如參比塊腐蝕或發光二極管的亮度變暗,儀器將打印出一個錯誤信息;校準條是有穩定特征的灰白色試條,這些校準條只能使用一次。校準前,應先清潔試紙托盤與運輸臂。步驟為:在“
READY—<START>”顯示時,按<Calibrate>鍵,放上校準條。再按<Calibrate>鍵,校準條被送入機器內,屏幕顯示“Calibrating”(正在校準),約一分鐘后,標準結果將被打印出。“Calibrating O.K”,表示校準成功。
8. 操作步驟:
8.1 按<START>鍵,顯示“Prepare Strip”,此時試條筒中拿出試條。
8.2 約4秒鐘后,顯示“Dip Strip 1”,同時綠燈閃爍,將試條浸入尿樣中。
8.3 當顯示“Insert Strip 1”,把試條放在試條托盤上,此時綠燈亮,若要人工輸入顏色,按<Color>鍵,再按<Set>鍵,選擇相近的顏色,最后按<Enter>鍵確認,同樣也可人工輸入濁度。
8.4 約20秒后,顯示“Dip Strip 2”,然后重復以上過程。
每一個測量完成后將自動打印出結果。
9. 結果判斷:淡黃色(-),淡黃綠色(+/-),黃綠色(+),綠色(++),灰綠色(+++),灰蘭色(++++)
10. 質量控制:質控液的使用,低濃度質控液(蛋白質
1.5g/L)蛋白定性應為(++);高濃度質控液(10g/L)蛋白定性為(++++)。
11. 參考范圍:陰性
12. 臨床意義:分為功能性,體位性,病理性蛋白尿,后者見于腎炎,腎病綜合癥。
13. 操作性能:快速簡便,特異性強,靈敏度高,重復性好。
14. 方法局限性
14.1 試帶應干燥,避光保存,遠離酸性和堿性物質。避免用(濕)手觸摸試帶的試劑墊部分,以防試帶污染失效。
14.2 渾濁尿不影響比色,但尿液顏色異常(如血尿,血紅蛋白尿,膽紅素尿)將影響結果的觀察。
15. 注意事項
15.1 干擾因素的控制與分析
15.1.1 PH:尿液偏堿時(PH>9),干化學試帶法可呈假陽性;尿液偏酸(PH<3)則會引起蛋白假陰性。因此,實驗前需先將尿液PH調至5—6。
15.1.2 藥物:當患者應用大劑量青霉素鉀鹽,慶大霉素,磺胺,PAS,含碘照影劑時,可使化學試帶法呈假陰性。
15.1.3 反應時間和標本量:試帶法需要足夠的反應時間和標本量,因此檢測時要求試帶充分浸濕,但不宜長時間浸泡。時間過短,標本不足,反應不完全使結果偏低;時間太長使試帶上包埋的藥物洗脫至尿中,也會導致結果偏低。
15.2 試帶的差異 不同廠家不同批號的試帶顯色有差異,故強調使用嚴格標準化的試帶。
16. 當檢驗系統(儀器)不能工作時,所采取的補救措施:當檢驗系統(儀器)不能工作時,可聯系儀器廠家,進行緊急修理,如一時
不能修好,如別的實驗室有同類儀器可到別的儀器上先測,如別的實驗室無同類儀器,申請廠家送一臺能正常工作的儀器代替。