1. 實驗原理
血紅蛋白中的亞鐵血紅素與過氧化物酶的結構和功能相似,具有弱過氧化物酶活性,能催化過氧化氫釋放新生態氧,氧化色原物而呈藍色,借以檢出微量的血紅蛋白。
2. 標本采集
2.1 標本采集前病人準備:以清晨第一次尿為宜,急診患者可隨時留取。
2.2 標本種類:新鮮尿液
2.3 標本要求:采集患者尿液標本時,盛尿液的容器必須清潔干燥,要求留取中段尿。
3. 標本儲存:從排出到檢測應在2小時內完成。如不能及時送檢或分析,應置4℃下冷藏保存,但冷藏時間不得超過6小時。
4. 標本運輸:室溫運輸。
5. 標本拒收標準:細菌,經血,白帶,精液,糞便污染標本不能作測定。
6. 試劑
6.1 試劑名稱 Combur10 TestR M
6.2 試劑廠家 德國 Roche 診斷試劑公司
6.3 包裝規格:100Test/kit
6.4 試劑盒組成:試紙條:100條
6.5 試劑儲存條件及有效期:試劑盒貯存于2-30℃條件下,可使用至試劑盒所標示有效期。
7. 儀器設備
7.1 儀器名稱:羅氏尿液分析儀
7.2 儀器廠家:Roche
7.3 儀器型號:MiditronR Junior II
7.4 儀器校準程序:在使用過程中,一般是兩周校準一次,如超過此期限,儀器會提示“Please Calibrate”(請校準)。通過測定內部參比塊,環境溫度和光學系統的改變都可被補償。當條件改變很大時,比如參比塊腐蝕或發光二極管的亮度變暗,儀器將打印出一個錯誤信息;校準條是有穩定特征的灰白色試條,這些校準條只能使用一次。校準前,應先清潔試紙托盤與運輸臂。步驟為:在“
READY—<START>”顯示時,按<Calibrate>鍵,放上校準條。再按<Calibrate>鍵,校準條被送入機器內,屏幕顯示“Calibrating”(正在校準),約一分鐘后,標準結果將被打印出。“Calibrating O.K”,表示校準成功。
8. 操作步驟:
8.1 按<START>鍵,顯示“Prepare Strip”,此時試條筒中拿出試條。
8.2 約4秒鐘后,顯示“Dip Strip 1”,同時綠燈閃爍,將試條浸入尿樣中。
8.3 當顯示“Insert Strip 1”,把試條放在試條托盤上,此時綠燈亮,若要人工輸入顏色,按<Color>鍵,再按<Set>鍵,選擇相近的顏色,最后按<Enter>鍵確認,同樣也可人工輸入濁度。
8.4 約20秒后,顯示“Dip Strip 2”,然后重復以上過程。
8.5 每一個測量完成后將自動打印出結果。
9. 結果判斷:淺棕色為(—),淺藍綠色為(+),藍綠色為(++),藍色為(+++),深藍色為(++++)
10. 質量控制:質控尿液的應用:用人工質控尿液進行空內質控,低濃度質控液應為(+),高濃度質控液應為(+++)。
11. 參考范圍:陰性
12. 臨床意義:正常人尿液中無游離血紅蛋白。當體內大量溶血,尤其是血管內溶血,血液中游離血紅蛋白可大量增加,當超過1.0-1.35g/L時,即出現血紅蛋白尿。此種情況常見于血型不合輸血,陣發性睡眠性血紅蛋白尿,寒冷性血紅蛋白尿,急性溶血性疾病等。還可見于各種病毒感染,鏈球菌敗血癥,瘧疾,大面積燒傷,體外循環,腎透析,手術后所致的紅細胞大量破壞等。
13. 操作性能:快速簡便,特異性強,靈敏度高,重復性好。
14. 方法局限性
14.1 試帶應妥善保存,注意有效期并避免污染。
14.2 尿液必須新鮮,以免因紅細胞破壞,導致干化學試帶法與顯微鏡檢查的人為誤差。
14.3 各種原因導致尿中出現紅細胞,可致假陽性。
14.4 VitC對本實驗有抑制作用,可致假陰性。
14.5
路感染時,由于細菌產生過氧化物酶而引起假陽性。某些氧化物如漂白粉也可致假陽性。
14.6 濃縮尿,高蛋白尿可降低試帶反應的靈敏度。
14.7 試帶上出現綠色斑點提示為完整紅細胞所致。
15. 當檢驗系統(儀器)不能工作時,所采取的補救措施
當檢驗系統(儀器)不能工作時,可聯系儀器廠家,進行緊急修理,如一時不能修好,如別的實驗室有同類儀器可到別的儀器上先測,如別的實驗室無同類儀器,申請廠家送一臺能正常工作的儀器代替。