二、儀器一般工作流程
生化分析儀的正確應用,只是掌握了測定技術原理還不夠,還需要對具體儀器的工作流程及測定計算方法有足夠的了解。
(一)一般工作流程
工作流程可以通過儀器的測定周期來考察。重點關注比色杯空白讀數點(CB)、加樣品點(S)、各試劑加液點(R1、R2、……)、試劑空白讀數點(RB)、各測定讀數點(P)、各點時間間隔及周期總時間等。每個儀器一般都在反應轉盤的固定位置和反應測定周期的固定時間設置樣品試劑和稀釋的加液位,以及測定讀數點。如HITACHI 7170在P1到P34周期為10分鐘時,PO前加樣品,Rl在Pl前,R2在P5和P6間,R3在P16和P17間,R4在:P33和P34間。
(二)數據處理計算方法
儀器在各個吸光度讀數點讀取的吸光度數據,并不一定都納人濃度計算。儀器往往根據儀器定義和操作者設定的要求,對吸光度原始數據作計算處理,轉換成所謂反應數據,再按系數或公式作濃度計算。舉例如下:
1.Monarch 1 000兩點終點法的反應數據。(終點測定吸光度一終點空白吸光度)一(始點測定吸光度一始點空白吸光度)。
2.0LYHPUS AU 600試劑空白數據:P0點試劑空白(RB)=P0點吸光度一比色杯水空白(wB);任一測定點試劑空白(RB )。該點吸光度一比色杯水空白(WB)。
3.HITACH 7170的終點法測定點(A )吸光度計算為(AX+AX-1)/2。實際吸光度=吸光度數據×10 000。
4.AU 600的終點法(帶試劑空白,END法)的反應數據=終點吸光度一P0點吸光度(試劑空白,RB)。終點法(不帶試劑空白,END).法)的反應數據=終點吸光度-比色杯水空白(WB)。
5.Au 600的兩點法(自身空白)的反應數據=[加第二試劑后測定點讀數一P0點讀數]一[加第二試劑前測定點讀數一PO點讀數。
三、主要操作程序
(一)儀器運行前操作程序
主要進行儀器的基本設置:
l.試驗項目設置對試驗名稱、編碼,試驗組合(Profile)、試驗輪次(Round),必要時包括試驗順序等設置。
2.各試驗的參數設置包括試驗間比值、結果核對等參數的設定。
3.劑設置根據有關試驗參數,設置各試驗的試劑位、試劑瓶規格,必要時設定試劑批號、失效期等。
4.校準品設置對校準品的位置、濃度和數量等進行設置。
5.質控設置 根據質控要求。設置質控物個數,質控規則,質控項目及相應質控參數等。
6.樣品管設置 包括樣品管類型,殘留液高度(死體積),識別方式等設置。
7.其他設置對數據傳輸方式、結果報告格式、復查方式及復查標準等設置。
(二)常規操作程序
開機(預熱、保養)-設置開始條件(日期時間索引、輪次、樣品起始號等)-根據需要,申請校準、質控和病人測定項目(包括架號、杯號或順序號。測定中可繼續申請)_裝載校準品、質控物和病人標本-裝載試劑-核對儀器起始狀態(未應用條碼系統,采用順序識別樣品時,尤其要核對測定起始編號是否與樣品架號和申請號相符)-定標和質控測定-檢查定標和質控結果-病人標本測定-測定過程監控(試劑檢查,觀察分析結果,編輯校正)-數據傳遞(打印報告,向檢驗管理系統傳輸,包括工作量統計、財務統計、病人情況追蹤、質控分析等)。測定后保養。
(三)測定結果檢查分析
1.要了解和熟悉儀器的各種警示符號的含義與作用在正確設定參數的前提下,利用各種警示符能提高我們發現問題和解決問題的效率。
2.要熟悉和靈活運用儀器的相關操作屏(界面) 如:用反應過程監測(Reaction Monitor),觀察反應時間進程曲線;用校準追蹤(Calibration Trace)回顧分析校準曲線;利用統計(Statistics)了解不同日期段病人測定均值及數據分析;運用分析數據編輯(Data Edit)察看和校正測定數據。
3.校準的檢查要充分利用儀器設置的功能,監測校準曲線圖形、各校準點吸光度值(不能忽略試劑空白值及空白速率值)、計算K值等的波動情況,以及與以往的比較。必要時,應進一步檢查反應時間進程曲線。必須結合質控數據來把握實驗條件。
4.結果的檢查除了目測觀察或用血清指數了解標本性狀,學會分析反應時間進程曲線及數據是重要的基本功。
四、基本測定方法
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