酸度取本品1.0g,加水50ml使溶解,立即加溴麝香草酚藍指示液1滴,溶液應顯綠色或黃色,用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)滴定至微藍色,消耗氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)不得過0.2ml溶液的澄清度與顏色取本品1.0g,加水50m1使溶解,溶液應澄清無色;如顯渾濁,與1號濁度標準液(通則0902第法)比較,不得更濃;如顯色,與黃色1號標準比色液(通則0901第一法)比較,不得更深。溴化物取本品0.50g,加水10ml溶解,加稀硝酸0.5ml與硝酸銀試液1ml,加熱至沸,放冷,加水稀釋成25ml,搖勻,與標準溴化鉀溶液11.0ml[每1ml標準溴化鉀溶液相當于0.01mg的溴(Br)],用同一方法制成的對照液比較,不得更濃有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定溶劑甲醇-0.544%磷酸二氫鉀溶液(1:1)。
供試品溶液取本品,精密稱定,加溶劑溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液對照溶液精密量取供試品溶液適量,用溶劑定量稀釋制成每1ml中約含1pg的溶液。對照品溶液取可可堿對照品、茶堿對照品、咖啡因對照品與己酮可可堿對照品,精密稱定,加溶劑溶解并定量稀釋制成每1ml中各約含1g的混合溶液。色譜條件用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相A為甲醇-0.544%磷酸二氫鉀溶液(3:7),流動相B為甲醇0.544%磷酸二氫鉀溶液(7:3),按下表進行梯度洗脫;檢測波長為272nm;進樣體積20l時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)438614系統適用性要求對照品溶液色譜圖中,出峰順序為可可堿峰、茶堿峰、咖啡因峰與己酮可可堿峰。
已酮可可堿峰的保留時間約為12分鐘,茶堿峰與咖啡因峰的分離度應大于4.0,咖啡因峰與己酮可可堿峰的分離度應大于10.0。測定法精密量取供試品溶液、對照溶液與對照品溶液分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖限度供試品溶液的色譜圖中如有與可可堿峰、茶堿峰或咖啡因峰保留時間一致的色譜峰,按外標法以峰面積計算均不得過0.1%;其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液的主峰面積(0.1%);雜質總量不得過0.5%。干燥失重取本品,在60℃減壓干燥至恒重,減失重量不得過0.5%(通則0831)。熾灼殘渣不得過0.1%(通則0841)重金屬取本品1.0g,加稀醋酸2ml與適量水溶解成25ml,依法檢查(通則0821第一法),含重金屬不得過百萬分之二十。