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  • 發布時間:2021-04-21 06:53 原文鏈接: 布魯菌病的實驗室檢驗方法及操作步驟


    1.布氏桿菌病的平板凝集試驗 試驗目的:利用本試驗對大量樣本進行初步篩選。篩選出的陽性反應血清,再做試管凝集試驗,以試管凝集的結果為被檢血清的最終結果。 方法步驟: (1)取一長方形潔凈玻璃板,用玻璃鉛筆劃成若干方格,每格約4cm2,編號。 (2)分別吸取25μL被檢血清、生理鹽水、標準陽性血清、標準陰性血清加于不同編號的方格內,每吸一種成分需換一個吸頭。 (3)吸取25μL抗原加到玻璃板的每一個格內,用牙簽將抗原與血清充分混勻,每混勻一格需更換一根牙簽。 于室溫(15℃以上)靜置4min觀察結果,如室溫過低,可適當加溫。 (4)在對照標準陽性血清(+)、標準陰性血清(一)、生理鹽水(一)反應正常的前提下,被檢血清出現大的凝集片或小的顆粒狀物、液體透明判為陽性(+),液體均勻混濁,無任何凝集物判為陰性(一)。 2.布氏桿菌病的試管凝集試驗 實驗目的:試管凝集試驗是一種定量試驗,可排除玻片法凝集試驗的非特異凝集,是鑒定細菌更為準確可靠的凝集試驗,用以檢測待檢血清中是否存在相應抗體和測定該抗體的含量,以協助臨床診斷或供流行病學調查。 方法步驟見下表。 試管凝集試驗術式表 mL 13-22-39-19-1.jpg 注:檢查羊時.用5%石炭酸的10%鹽水稀釋血清和抗原;檢查牛時,用5%石炭酸生理鹽水稀釋抗原和血清。 各試管加完抗原后,充分振蕩,置于37℃溫箱中4~10h,取出后置于室溫18~24h,然后觀察并記錄結果。待檢血清稀釋度:豬、羊、犬為1:25,1:50,1:100,1:200,牛、馬和駱駝為1: 50,1:100,1:200,1:400等四個稀釋度。大規模檢疫可只用兩個稀釋度,即豬、羊、犬為1: 25和1:50,牛、馬和駱駝為1:50和1:100。 結果判定:判定結果時用“+”表示反應的強度。 ++++,液體完全透明,菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底,振蕩時,沉淀物呈片狀、塊狀或顆粒狀,表示菌體100%被凝集。 +++,液體稍有混濁,菌體大部分被凝集沉于管底,振蕩時情況同上,表示菌體75%被凝集。 ++,液體不甚透明,呈淡乳白色混濁,管底有明顯的凝集沉淀,振蕩時有塊狀或小片絮狀物,表示菌體50%被凝集。 +,液體透明度不明顯或不透明,管底有不甚顯著的沉淀或僅有沉淀的痕跡,表示菌體25%被凝集。 一:液體完全混濁,不透明,有時管底中央有一部分圓點狀沉淀物,但振蕩后立即散開呈均勻混濁,表示菌體完全不凝集。 確定血清凝集價(滴度)時,應以出現“++”以上凝集現象的最高稀釋度為準。 判定標準:牛、馬和駱駝凝集價為1:100以上,豬、羊和犬的凝集價為1:50判為陽性。牛、馬和駱駝凝集價為1:50,豬、羊和犬凝集價為1: 25判為可疑。 可疑反應的家畜,經3~4周后再采血重新檢查。牛和羊仍為可疑判為陽性,豬和馬仍為可疑,而畜群中又沒有病例和大批陽性病畜,則判為陰性。 3.虎紅平板凝集試驗 在清潔的玻片上加0. 03mL的被檢血清,然后再加入虎紅平板凝集抗原0.03mL,充分混合均勻,4min內觀察結果。 以出現可見的凝集現象判定陽性,無凝集現象為陰性,無可疑反應。 四、注意事項 1.待檢血清必須新鮮,無溶血現象和腐敗。 2.稀釋血清時,要反復吹吸幾次、完全混勻才能移入另一管,而且注意不要在吹吸時產生氣泡。 3.每次需做陽性血清、陰性血清和抗原三種對照,在結果判定時,要先檢查對照管,只有對照管均正確時才能檢查判定試驗管。

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