一. 直接法: 是zui早出現的方法,是將酶直接標記在特異性抗體上,與標本中的抗原結合,讓酶催化底物反應產生有色物質,可以在光鏡下檢測. 直接法放大作用小,不夠敏感, 且標記一種抗體只能檢測一種抗原,所以應用就受到了限制.
二 . 間接法
是將酶標記在第二抗體上,形成抗原/一抗 /二抗-酶復合物,zui后酶底物顯色來放大信號. 由于一抗多來源于兔,小鼠或山羊等有限的幾種動物,所以僅需制備酶標記的一抗來源的IgG就可以檢測很多的抗體,放大效果也有所提高.為了追求更大的放大效果,人們有發明了PAP的橋聯法,雖然敏感性有所提高,但是同時出現了較高的非特異性背景,及假陽性等問題.隨后被生物素－卵白素系統所取代。
三. 生物素-卵白素系統
生物素(biotin)是一種244Da的小分子的維生素。卵白素（avidin)又稱作抗生物素是一種68kDa的糖蛋白。生物素與抗生物素有很強的親合力，兩者一旦結合就很難解離。同時，生物素和抗生物素都具有與其他示蹤劑，如熒光素，過氧化物酶等相結合的能力。抗體
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