糖類
(28) 鄰苯二甲基苯胺: 檢查還原糖.
噴灑劑: 0.93克苯氨,1.66克鄰苯二甲酸溶于100毫升水飽和的正丁醇中.
噴灑后處理: 105℃加熱10分鐘.
(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：檢查還原糖及其他還原物質。
溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液； 溶液II：1N氫氧化鈉。
噴灑液：I，II，臨用前等體積混合。
噴灑后處理：100℃加熱5～10分鐘，得紅色斑點。
（30）Keller-Kiliani試劑：檢查α－去氧糖，常用于強心甙。
試液：100毫升冰醋酸加三氯化鐵試液0.5毫升混合均勻.
試樣1毫克加試液2毫克溶解后,沿試官管壁滴入濃硫酸2毫升,接觸面即顯棕色,漸變淺綠,藍色.最后冰醋酸層全部燃呈藍色.
(31) 1,3-二羥基萘-磷酸: 檢查糖類.
噴灑液: 0.2%1,3-二羥基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,與10毫升85%磷酸混合.
(32) 費林溶液(Fehling): 檢查還原糖.
溶液I: 69.3克結晶硫酸銅溶于1000毫升水中.
上述二溶液如不清可濾過.臨用前等體積混合.
氨基酸
(33) 茚三酮: 檢查氨基酸及氨基糖.
噴灑劑: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).
噴灑后處理: 110℃加熱至斑點出現.
(34) 吲哚醌: 檢查氨基酸和一些肽.
噴灑劑: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.
噴灑后處理: 100~110℃加熱10分鐘.
(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin試劑): 檢查氨基酸.
噴灑劑: 新鮮制備0.02克1,2-萘醌-4-磺酸鈉,溶于100毫升5%碳酸鈉中.
噴灑后處理: 室溫放于,不同氨基酸出現不同顏色.
有機酸
(36) 酸堿指示劑: 檢查有機酸.
噴灑劑: 0.05%溴酚藍(或溴甲酚綠,或溴麝香草酚藍)的乙醇溶液.
(37) 氧化還原顯色劑: 檢查有機酸.
噴灑劑: I. 0.075%溴甲酚綠及0.025%溴酚藍的無水乙醇液.
II. 0.5%高錳酸鉀及1%碳酸鈉.10H2O的蒸餾水液.臨用前,取I和II按1:1混合后噴酒.
噴酒后處理: 穩定時間為5~10分鐘.對不同的有機酸在紙譜上呈現不同顏色.
(38) ??? (Acridine): 檢查酸.
噴灑劑: 0.005%的??乙醇溶劑.
紫外線分析燈下呈黃色熒光.
(39) 芳香胺-還原糖: 檢查酸.
噴灑劑: 芳香胺(如苯氨5克)和還原糖(如木質糖5克)溶于50%含水乙醇中.
噴灑后處理: 125~130℃加熱出現棕色斑點.
實驗16 氧化苦參堿的提取和鑒定
中藥苦參是豆科植物苦參(Sophors Flavescens Ait)的干燥根,味苦,性寒,有清熱燥濕,殺蟲等作用.臨床上用于治療痢病,黃膽和皮膚瘙癢癥.近年還發現具有抗腫瘤,升白,抗病毒性肝炎等藥理作用,苦參中主要含生物堿,此外還有黃銅類成分.
一, 苦參中主要已知生物堿的結構和性質
1.氧化苦參堿（oxymarrine）C12H24N2O2，白色棱晶，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，不溶于乙醚，苯。溶點：207～208℃（不含結晶水）162～163℃（含一個結晶水）77～78℃（含多個結晶水）結晶水可在145～150℃／0。002mmHg下除去，可于許多金屬離子如Fe2＋ Cu2+ Cr3+等生成沉淀，［α］？？＋47.7℃(乙醇).
2.苦參堿(matrine)C15H24N2O在輕石油醚中結晶時，由于溫度等條件不同，可以得到αβδ三種結晶（溶點分別為76℃ 87℃ 84℃）和一種流體即γ型。通常室溫下結晶得到的是α型，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，溶于苯，在乙醚中溶解度小。［α］？？＋39.11[乙醇]
3.脫氫苦參堿(槐果堿)（sophocarpine）C15H24N2O白色棱晶。溶點80～81℃，易溶于甲醇乙醇氯仿，略溶于苯和乙醚，在水中溶解度小。［α］？-29.44(乙醇)
4.槐定(sophoridine)C15H24N2O白色棱晶，溶點106～108℃，為苦參堿的一種空間異構體。
二．實驗目的與要求
（1） 通過苦參生物堿的提取掌握用滲濾法和離子交換法提取生物堿的方法。
（2） 掌握沙氏提取器的使用方法。
（3） 掌握氧化鋁吸附薄層層離法和柱層層離法鑒定和分離生物堿的方法。
三．原理
氧化苦參堿為喹諾里西汀類生物堿，叔胺氮氧化合物與酸成鹽溶于水與非生物堿分開，提取的生物堿鹽的陽離子部分與H+型樹脂發生交換生物堿吸附在柱上，吸附有生物堿的樹脂，堿化呈游離生物堿，可被氯仿等有機溶劑提取。
R-SO3-Na+ ＋ H+CL- ——>R-SO3-H+ + NaCL
SO3Na + H2O
生物堿
四. 實驗方法.
1 酸水提取和離子交換
（1） 滲漉法
取苦參堿400克,加入適量0.5%(g/v)的鹽酸濕潤后放置一小時，裝入滲濾液的PH值及生物堿反應，使滲濾液通過離子交換脂柱，待經過樹脂柱的濾液生物堿反應或微弱的反應時，停止交換，將樹脂倒入燒杯中，酮蒸餾水洗滌幾次，濾干，樹脂放入搪瓷盤中自然晾干。
（2） 浸提法
300克？？0.5HCL(g/v) 6倍量浸泡48小時，浸出浸液，。。在處理1～2次，2次浸液全體合并。
2 總生物堿的洗脫
將晾干的樹脂放入燒杯中，加14％氨水，攪勻，使溫度適宜（樹脂充分膨脹，但又無過剩的水）約用氨水30～60毫升，靜置20分鐘后，裝入沙氏提取器中，用400毫升95％的乙醇回流洗脫4～5小時（或用氯仿回流提取5～8小時）回收溶劑至干，所得浸膏用70～80毫升氯仿溶解，并轉入分液漏斗，充分靜置后，棄掉上層油狀物，過濾氯酚溶液后用無水硫酸鈉干燥，回收氯仿至干，殘留物用2～3倍量丙酮處理，即析出固體粉末，放置，過濾，得生物堿粗品，丙酮重結晶一次得淺黃色產品。
3 苦參生物堿的氧化鋁薄層鑒定。
樣品：氧化苦參堿標準品，粗品，母液
溶劑系統：氯仿：甲醇＝19：1（二次展開）
石油醚：乙醚：甲醇＝9：9：1
顯色劑：改良碘化鉍鉀（改良Dragendorff）
4 氧化苦參堿的分離與純制
（1） 取0.2克氧化苦參堿粗品用少量氧化鋁攪伴,30克氧化鋁(80~120目,I~III)裝柱(1＊45),先加30毫升氯仿洗脫,再用氯仿和甲醇(99:1)混合溶劑洗脫.速度控制在1毫升/分左右,每10毫升收集一份,經薄層檢識,將氧化苦參堿的流份合并,回收溶劑至干,用少量丙酮溶解,放置吸晶,得氧化苦參堿純品,薄層檢識后,干燥,側溶點.
（2） 苦參總堿0.1克進行低壓柱層析
吸附劑:薄層用硅膠15克(已用NH4OH減活)
洗脫劑:CHCL3 50毫升,CHCL3-MeOH(98:2)100毫升,(95:5)100毫升,MeOH100毫升
流速1毫升/分 10毫升收集一份.
5. 氧化苦參堿的還原
取氧化苦參堿粗品1.0克,溶于15毫升10%鹽酸水溶液中,放入1.0克鋅粉,室溫放置,不時搖動,放置24小時后過濾,濃度調到PH=9~10,用500毫升乙醚分多次提取.合并乙醚溶液,無水硫酸鈉干燥過夜,回收乙醚淡黃色粘稠體放置于冰箱中,得淺黃色固體,石油醚重結晶后得白色結晶,測熔點.
薄層檢識
氧化鋁干板(120目以上)
樣品:苦參堿標準品,氧化苦參堿標準品,苦參堿
溶劑系統:氯仿:甲醇=8:2
顯色劑:改良碘化鉍鉀溶液
附:陽離子交換樹脂的處理
(1) 預處理及轉型:
將100克聚苯乙烯磺酸鈉型樹脂(交聯度1~7%粒度范圍16~50目)放入燒杯中,用80℃蒸餾水溫熱使之充分膨脹1小時,后加入2N鹽酸300毫升洗,水洗至PH5~7,5%NaOH浸泡1H???????浸泡過夜(注意開始要攪動幾次).次日把樹脂裝入層離柱,并使全部酸液流過樹脂柱,用蒸餾水洗至中性至無氯離子反應為止,可用于無生物堿交換.
(2) 再生
將已洗去生物堿的樹脂,置滲濾筒中,加2倍的2N鹽酸浸泡過夜,次日樹脂上面的鹽酸慢慢流過樹脂,用水洗至中性,然后用5%的氫氧化鈉浸泡1~2小時,時常攪伴,傾倒出上層堿液,用餾水洗至中性,在空氣中晾干,留作下一次使用.
四. 思考題
1. 酸水法及離子交換樹脂法提取分離生物堿的原理.
2. 應如何檢查 (1)滲濾液中是否含有生物堿?
(2)滲濾液中生物堿是否可以被交換在樹脂上?
(3)離子交換樹脂是否已達到飽和?
3. 氧化鋁薄層層析的原理是什么?適用于什么成分的分離鑒定?
4. 當用硅膠薄層板層析時應如何操作?
五. 參考文獻.
1. 江蘇中醫學院:中藥大辭典 上海人民出版社 1977年
2. 張寧芳: 中草藥通訊1977(1):38 1977(2):39. 1977
3. 中國醫科院第五研究室: 放射醫學 1977(1):1.1977
4. 白世澤等: 中草藥 13(4);8.1982
5. Shigenobu Okuda : Chem Pharm Bull 13:485.1965
實驗13 蘆丁的提取,分離及鑒定
蘆丁(Rutin)亦稱蕓香苷（Rstinoside），廣泛存在于植物界中，其中以槐米和蕎麥葉的含量較高，可作為提取蘆丁的原料。
槐花米系豆科植物，Sophora japonica的花蕾，自古作為止血藥。槐花米中所含主要成分蕓香苷有減少毛細血管的通透性作用，臨床上主要為防止高血壓病的輔助治療藥物。此外，蘆丁對于放射性傷害所引起的出血癥亦有一定作用。
一．實驗的目的和要求
1． 以蘆丁為實例學習黃酮類成分的提取分離方法。
2． 掌握黃酮類成分的主要性質及黃酮苷，甙元和糖部分的鑒定方法。
3． 通過？皮素紫外吸收光譜的測定及應用化學位移確定黃酮類烴基位量的方法。
4． 通過？皮素與其五乙酰化合物的紅外光譜測定該化合物的功能團并與標準譜對照。
二．槐花米中已知主要成分的理化性質：
槐花米中蘆丁的含量可高達20％，另含少量的皂苷，皂苷水解后，可得到樺皮醇（Betulin C30H50O2）及槐二醇（Sophoradiol，C30H50O2）。
1． 蘆丁（蕓香苷 Rutin）
本品為淡黃色細小針狀結晶，C27H36O16。3H2O，MP為177～178℃，無水物MP190℃（不完全），214～215℃發泡分解。蘆丁溶于熱水（1：200），難溶于冷水（1：8000）；溶于熱乙醇（1：7），冷乙醇（1：100）；熱乙醇（1：30）。冷乙醇（1：300），難溶于乙酸乙酯，丙酮，不溶于苯，氯仿，乙醚，及石油醚等溶劑。易溶于堿液中呈黃色，酸化后又析出。
2．？皮素（Quercettin）
即云香苷苷元，為黃色結晶，C13H10O7，MP313～314℃，無水溶點316℃。？皮素溶于熱乙醇（1：23），冷乙醇（1：300）。可溶于冰醋酸，吡啶，乙酸乙酯，丙酮等溶劑。不溶于石油醚，苯，乙醚，氯仿和水中。
3． 皂苷
易溶于水，吡啶，能溶于甲醇。經酸水解后得樺皮醇及槐二醇，均溶于苯，乙醚，氯仿，丙酮，乙酸乙酯，乙醇，甲醇。
三．自槐花米中提取蘆丁：
1． 提取方法：
方法1 ：取槐花米40克（完整），置于100毫升燒杯中，用冷水快速清洗去泥沙等雜質瀝干水，加0.4％硼砂水沸熔液400毫升,直火加熱微沸,即時側PH值,當PH數值改變成微酸性時,以石灰乳調至PH8,繼續加熱微沸30分鐘,隨時補充水份,同時保持PH8,靜置約5~10分鐘,傾出上清液,用尼龍布過濾,重復提取一次,合并濾液,將濾液用鹽酸調至PH3左右,再加泥泊金,放置過夜,抽濾用水洗3~4次,空氣自然干燥得粗蘆丁.
方法2：取槐花米20克,置于500毫升圓底燒瓶中,加乙醇150毫升,加熱回流1小時,稍冷后抽濾,濾渣再加乙醇100毫升回流1小時,合并乙醇提取液,放冷,析出絮狀沉淀.過濾,濾液濃縮至50毫升,放置過夜,析出結晶,濾去母液繼續濃縮一半,放置又析出結晶.合并結晶,用乙醚30~50毫升分次洗去脂溶性成分(油脂,葉綠素等),再用丙酮10毫升洗滌一次,得粗蘆丁.
2． 重結晶方法
方法一：取粗蘆丁2克，加乙醇50～60毫升加熱溶解，呈熱抽濾，將濾液濃縮至20～30毫升，放置，析出結晶，母液再濃縮一半，又析出結晶。合并結晶再用乙醇重結晶一次。
方法二：取粗蘆丁2克，加去離子水或蒸餾水400毫升，加熱煮沸，趁熱煮沸，趁熱抽濾（以滑石粉助濾）；放置過夜析晶（或放冷析晶）。抽濾。得精制蘆丁。
思考題：提取蘆丁工藝中影響產量和質量的因素是什么？為什么藥加硼砂水溶液？
記錄：粗蘆丁得率多少？精制蘆丁得率多少？溶點？
3． 蘆丁的水解
取蘆丁1克，加2％H2SO4 80毫升，小火加熱微沸回流30分鐘至1小時。開始加熱10分鐘為澄清溶液，逐漸析出黃色小針狀結晶，即？皮素，抽濾取結晶（保留濾液20毫升，以檢查其中所含單糖），加50％乙醇（按1克90毫升量）加熱回流使？皮素粗晶溶解，趁熱抽濾，放置結晶，抽濾得精制品，在減壓下110℃干燥可得？皮素無水物。測熔點，進行紙層析法鑒定。
思考題：蘆丁水解不完全時將產生什么結果？
記錄：蘆丁的水解產物是什么？主要產物得率？溶點？
四．蘆丁，？皮素，糖及？皮素衍生物的鑒定：
1． 紙層析：
新華一號層析濾紙
樣品：自制蘆丁，？皮素
對照品：蘆丁，？皮素
展開劑：（1）正丁醇－醋酸－水（4：1：5上層或4：1：1）
（2）25％醋酸水溶液
（3）85％醋酸水溶液
顯色： （1）可見光下觀察，再在紫外燈下觀察
（2）經氨氣熏后再觀察
（3）噴三氯化鋁試劑后再觀察
2． 蘆丁和？皮素的聚酰胺薄層鑒定：
樣品：同紙層析
展開劑：乙醇－水（7：3）
顯色：同紙層析
3． 糖的檢出——紙層析法
取上述濾出？皮素時保留的水解濾液200毫升，加Ba(OH)2細粉（約2.ǚ克）
中和至PH7,濾除生成的BaSO4沉淀(可用滑石粉助濾),濾液濃縮至1毫升,供紙層析法點樣用.
展開劑：正丁醇－醋酸－水（4：1：5上層或4：1：1）
對照品：葡萄糖，鼠李糖水溶液
顯色劑：苯氨鄰苯二甲酸試劑噴后，105℃烘10分鐘，顯棕色或棕紅色斑點。
4． 紅外光譜測定：
5． ？皮素五甲醚的制備：
取？皮素結晶400Mg置于150毫升三頸瓶中，加50毫升無水丙酮，裝上電動攪拌器，冷凝管及溫度計，加熱回流攪拌，每間隔一適當時間加入無水碳酸鉀0.2克和硫酸二甲醇0.2毫升,大約1.5小時后加完4克無水碳酸二甲酮,繼續加熱回流攪拌直至溶液黃色完全消退為止,約需4~5小時,停止加熱,取下燒杯,反應液經過濾,沉淀用熱丙酮洗滌數次,合并系,濾液,蒸餾回收部分丙酮,留存10~15毫升,放置,漸漸析出無色結晶,表示過?的硫酸二甲酯存在,應加5%NaOH數滴,振搖使硫酸二甲酯水解,此時又可析出一小部分結晶(檢查所析出結晶對1%FeCL3的反應,甲基化完全者呈負反應),合并,以乙醇重結晶,得?皮素五甲醚(MP152~153℃).甲基化不完全者時對三氯化鐵出呈正反應,主要產品為3,7,3”,4”甲醚,MP161~161.5℃.
6．？皮素的降解
取？皮素50Mg，置于50毫升的圓底燒瓶中，加水50毫升，乙醇6毫升，KOH？，置水浴上加熱回流10小時，蒸去乙醇，加水50毫升溶解，用稀鹽酸酸化至PH2～3，用乙醚萃取3次，合并乙醚液，回收乙醚，蒸滯小體積供薄層層析點樣用。
7．？皮素降解產物的薄層層析：
硅膠－CMC－Na薄層
對照品：原兒茶酸（Protocatechuic acid），間苯三酚9Phlorogluoinol)。
展開劑：氯仿－丙酮－醋酸（8：2：0.5）
顯色劑：三氯化鐵試劑
思考題：
（1） 蘆丁和？皮素用不同展開劑系統展開層將出現什么結果？為什么？
（2） 蘆丁和？皮素聚酰胺薄層將出現什么結果？為什么？
（3） 試比較？皮素紅外光譜圖和五酰基？皮素紅外光譜圖的差異。
記錄：
（1） 蘆丁和？皮素的紙層析，聚酰胺薄層層析結果。
（2） 糖的檢出紙層析結果。
8．紫外吸收光譜測定？皮素
（一） 原理
利用紫外吸收光譜，測定黃酮化合物在加入各種電解質或絡合劑后吸收峰的位移，根據位移的情況，以判斷該化合物烴基的額位置。
（二） 試劑配制
1． 無水乙醇：用分析純的甲醇，加入10％CaO，放置24小時后并加熱回流1小時，回流時冷凝管頂端應安裝CaCL2干燥管，然后蒸餾得無水甲醇。
2． 甲醇鈉溶液：取0.25克金屬鈉,剪碎,小心的加入無水甲醇50毫升中,放置24小時后全溶.
3． 氫氧化鈉溶液：取2.5克無水三氯化鋁,加10毫升水溶解.
4． 三氯化鋁溶液：2.5克無水三氯化鋁(呈黃綠色)小心的加入無水甲醇50毫升中,放置24小時后全溶.
5． 醋酸鈉：用水粉狀醋酸鈉。
6． 硼酸飽和液：將無水硼酸加入適量無水甲醇，制成飽和溶液。
依照上述方法制備的貯備液可放置6個月。
(三)．測定方法：
１． 酮烴基位置的測定：
精密稱取黃酮樣品（？皮素）約１.２mg，用無水甲醇溶解，在稀釋至100毫升。
（1） 黃酮光譜：取樣品溶液約3毫升置于石英杯（1CM）中，在200～300nm波段內進行掃描。重測一次，視光譜的再現性。
（2） 氫氧化鈉光譜：取樣品溶液約3毫升置于石英杯中，加入氫氧化鈉溶液2～3滴立即測定。放置5分鐘后，在進行測定。
（3） 甲醇鈉光譜：取樣品溶液約3毫升置于石英杯中，加入甲醇鈉溶液5～7滴后，立即測定。放置5分鐘后，再進行測定。
（4） 三氯化鋁光譜：在盛有約3毫升樣品溶液的石英杯中，加入三氯化鋁溶液6滴，放置1分鐘后進行測定。測定后，加入3滴鹽酸溶液（濃鹽酸：水＝1：1），再進行測定。
（5） 醋酸鈉光譜：取樣品溶液約3毫升置于石英杯中，加入過量的無水醋酸鈉固體，搖勻；杯底剩有2mm的醋酸鈉后，二分內進行測定。
（三） 測定結果：
？皮素加位移試劑結界表（）
加入試劑 編號 II峰 I峰 位移值 羥基
無水甲醇 1 256 371
NaOH 2 430 I峰△59 4‘－OH
NaOH 5‘ 2‘ 分解 分解 3，4‘－OH
MeONa 3 416 I峰△45 3－OH
MeONa5 3‘ 分解 分解 3，4‘－OH
ALCL 4 270 450 I峰△79 3，5及3‘，4‘－OH
ALCL，／HCL 4‘ 265 425 I峰△54 3，4‘－OH
NaAc 5 277 387 II峰△21 7－OH
NaOAc／H3BO3 6 259 385 I峰△14 3，4‘－OH
, 克分子吸收系數的測定：根據已測定的黃酮光譜，測量吸收峰的波長和吸收峰前后20nm的波長范圍。然后取樣品溶液約3毫升，置于1cm的石英杯中，用紫外光譜儀，仔細測量在上述波長范圍內的各波長的吸收值，反復測定3次。
記錄：
（1） 位移測定結果
（2） 測定克分子吸收系數皂吸收峰前后20nm波長范圍內，依次測定波長和吸收值，用方格紙作圖，精確的測出吸收峰的波長和吸收值，記錄測定結果。
實驗三 薄層層析應用
定形點滴反應
鑒別天然產物中的化學成分,類別,純度和異同.
薄層板上原位化學反應
一.定性點滴反應
1.樣品
(1).氨基酸混合液
(2).薄荷油
(3).蘆丁甲醇溶液
(4)甘草次酸乙醇液
(5)原兒茶酸乙醇液
(6)小檗堿乙醇液
2.檢出試劑
(1).三氯化鐵1%乙醇溶液
(2).三氯化鋁1%乙醇溶液
(3).茚三酮0.2%乙醇溶液
(4).碘化鉍鉀(見附錄I)
(5).*香草醛-硫酸 0.5%硫酸-乙醇(4:1)溶液
(6)??酸5%乙醇溶液.
3.實驗方法.
取硅膠CMC-Na薄層板1~2塊,用軟鉛筆按下圖劃線,構成方格,將各樣品先滴加于相應的格子中,再將各試劑分別自空白其5逐點點加試劑,觀察并記錄反應變化.具腐蝕性試劑也可用空白磁板.
(1) (2) (3) (4) (5) (6) (7)
空白
(1)
(2)
(3)
(4)
*香草醛-硫酸為1克香草醛(Vanillin)溶于100毫升濃硫酸,或0.5克香草醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中,噴灑后用電吹風加熱至120℃,觀察顏色變化.
二.鑒別中草藥中的化學成分
1. 單向展層
例一. （1） 硅膠 CMC-Na 薄層 (載玻片板)
(2) 樣品 薄荷油,薄荷腦的0.1%乙醇溶液
（3）展開劑 ①石油醚
②乙酸乙酯
③石油醚－乙酸乙酯（85：15）
（4）顯色劑 香草醛－硫酸（壓板法）
點樣展層后，稍干，后扣在一塊同樣大小并涂布一層（不可多加，多了會使斑點擴散）顯色劑的玻璃板上，壓緊稍后一下，取除玻璃片，使薄層面向上，觀察層面向上，觀察顏色變化。由結果判斷何種展開劑最適合分離薄荷油？
例二． （1）硅膠CMC—Na薄層（載玻片板）
（2）樣品四季青提取物
原兒茶堿（Protocatechuic Acid）1％乙醇溶液
原兒茶堿（Protocatechuic Acid）1％乙醇溶液
（3）展開劑 ① 石油醚
②氯仿
③甲醇
④氯仿：丙酮（8：2）
⑤氯仿：丙酮：甲醇：醋酸（7：2：0.5：0.5）
(4) 顯色劑 三氯化鐵 1%乙醇溶液
由展層結果判斷選用何種展開劑為最合適?展開劑⑤中為何藥加醋酸。
2 雙向展層
（1） 硅膠CMC-Na薄層板（8＊8cm），不活化。在薄層板距兩邊各1.5cm交點的地方點樣品。
（2） 樣品？？氨基酸（精氨酸，脯氨酸，亮氨酸的1％水溶液）
（3） 展開劑：第I向為正丁醇－醋酸－水（4：1：1）（V/V）
第II向為苯酚－水（75：25）（W/W）（苯酚需要蒸后使用）
第一向展開劑展層后，用熱風吹使溶劑揮發，再將樣品已展層的一向作起始線，在第II向溶劑中展開。
（4） 顯色劑：0.2％茚三酮乙醇溶劑，噴灑后，以電吹風見加熱（110℃）顯色，觀察各斑點的顏色變化。最后噴灑2％硫酸》水溶液固色。
3．硝酸銀－硅膠薄層
（1） 硝酸銀硅膠懸浮漿的制備（2.5％AgNO3制硅膠薄層）：用20克硅膠G和55毫升水中含5g硝酸銀（8％）的溶液調制成，阿波常法捕薄層板（4＊7cm，約30塊）。避光陰干后于105℃活化半小時避光儲存備用。
（2） 樣品：1，龍腦 2，香橙醇 3，牛龍牛兒醇
（3） 展開劑：10％的硫酸乙醇液 二氮甲烷：氯仿：乙酸乙酯：正丁醇＝45：45：4.5：4.5
（4） 顯色點：110℃加熱