常用溶液的配制2

實驗概要

了解常用溶液的配制方法。

實驗步驟

1. 10 mmol/L MgSO₄：稱取 0.246 g MgSO₄，加入 80 mL 雙蒸水充分溶解，定容至 100 mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

2. 0.9% NaCl：稱取 0.9 g NaCl，加入 80 mL 雙蒸水充分溶解，定容至 100 mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

3. 卡那霉素（Km）儲存液（50 mg/mL）：稱取卡那霉素 0.5 g，溶于10 mL雙蒸水中，過濾除菌，分裝貯存于-20℃。

4. 氯霉素（Cm）儲存液（34 mg/mL）：稱取氯霉素 0.34 g，溶于 10 mL 無水乙醇中，過濾除菌，分裝貯存于-20℃。

5. 1 M NaOH：稱取 40 g NaOH 溶解于 900 mL雙蒸水中，定容至 1 L,室溫保存。

6. 10% SDS 溶液：稱取 10 g電泳級 SDS,溶解于100 mL雙蒸水中，室溫保存。

7. 0.5 mol/L EDTA 溶液（pH 8.0）：稱取 18.61 g Na₂EDTA·2H₂O溶解于80 mL水中，磁力攪拌器上劇烈攪拌，加入 NaOH 固體約 2 g，再滴加NaOH 溶液調 pH 至 8.0，定容至100 mL，高壓滅菌15 min，室溫保存。

8. Southern blot 試劑

    （1）0.25 mol/L HCl 鹽酸溶液：量取 1.931 mL 鹽酸，加入雙蒸水定容至 250 mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

    （2）變性液（1.5 mol/L NaCl，0.5 mol/L NaOH）：稱取 43.83 g NaCl 和 10 g NaOH，加入雙蒸水充分溶解，定容至 500 mL，室溫保存。

    （3）中和液（1 mol/L Tris-HCl，1.5 mol/L NaCl，pH 8.0）：稱取 121.14 g Tris和 87.66 g  NaCl，加入雙蒸水充分溶解，定容至 1 L，再滴加 HCl 溶液調 pH 至 8.0，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

    （4）馬來酸緩沖液（0.1 mol/L馬來酸，0.15 mol/L NaCl，pH 87.5）：稱取 11.607 g馬來酸和8.766 g NaCl，加入雙蒸水充分溶解，定容至1 L，再滴加NaOH 溶液調 pH 至 7.5，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

    （5）檢測緩沖液（0.1 mol/L Tris-HCl，0.1 mol/L NaCl，pH 9.5）：稱取 3.028 g Tris和1.461 g NaCl，加入雙蒸水充分溶解，定容至 250 mL，再滴加NaOH 溶液調 pH 至 9.5，室溫保存。

    （6）20 × SSC 溶液：稱取 88.23 g二水檸檬酸鈉，175.32 g NaCl，溶解于800 mL雙蒸水中，用 10 M NaOH調 PH 至 7.0，定容至 1 L，室溫保存。

    （7）洗膜液I〔2 × SSC，0.1%（W/V）SDS〕：于 800 mL雙蒸水中，加入100 mL 20 × SSC，10 mL 10% SDS，定容至 1 L，室溫保存。

    （8）洗膜液II〔0.1 × SSC，0.1%（W/V）SDS〕：于 800 mL 雙蒸水中，加入5 mL 20 × SSC，10 mL 10% SDS，定容至 1 L，室溫保存。

    （9）洗滌緩沖液〔0.3%（W/V）Tween-20〕：量取 1.5 mL Tween-20 滴入500 mL馬來酸緩沖液中混勻，室溫保存。

    （10）封閉液：量取20 mL 1 × Working solution和 20 mL 10 × Blocking solution，加入 200 mL 馬來酸緩沖液中混勻，室溫保存。

    （11）抗體溶液：按 1∶5000（150 mU/mL）將抗體（Anti-Dgoxigenin-AP）加入封閉液中，現用現配。

    （12）顯色溶液：吸取 100 μL顯色底物溶液（NBT/BCIP）加入 5 mL 檢測緩沖液中混勻，現用現配。