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  • 發布時間:2024-03-12 14:11 原文鏈接: 常用的細胞轉染方法

    轉染是將外源性基因導入細胞內的一種技術,是實驗室工作中經常涉及的基本方法。常規轉染技術可分為兩大類:瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析;后者外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體存在,外源DNA整合到染色體中概率很小,通常需要通過一些選擇性標記反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。

    轉染大致包括物理、化學和生物介導的三類途徑:

    1、物理法—電穿孔、顯微注射和基因槍法等;

    2、化學法—磷酸鈣共沉淀、脂質體轉染和多種陽離子物質介導的技術等;

    3、生物法—原生質體轉染和由病毒介導的轉染技術等。

    常見的轉染方法及比較

    轉染方法原理應用特點
    磷酸鈣法磷酸鈣DNA復合物吸附在細胞膜上,被細胞內吞穩定轉染
    瞬時性轉染
    不適用于原代細胞,
    操作簡便但重復性差 ,有些細胞不適用
    DEAE-右旋糖苷法帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞瞬時性轉染相對簡便、結果可重復,但對細胞有一定的毒副作用
    電穿孔法高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入細胞穩定轉染 瞬時性轉染適用性廣但細胞致死率高;DNA和細胞用量大, 需根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件
    病毒介導法通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中穩定轉染瞬時轉染可用于難轉染的細胞、原代細胞、體內細胞等
    陽離子脂質體法帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞穩定轉染瞬時轉染適用性廣,轉染效率高,重復性好,轉染效果隨細胞類型變化大
    基因槍法將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞瞬時性轉染可用于人的表皮細胞、纖維原細胞、淋巴細胞系以及原代細胞
    顯微注射法用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核穩定轉染 瞬時轉染轉染細胞數有限 ,多用于工程改造或轉基因、動物的胚胎細胞

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