一、過氧化物酶染色
染色原理
粒細胞和部分單核細胞的溶酶體顆粒中含有髓過氧化物酶(myeloperoxidase,
POX或MPO),能將底物H202分解，產生新生態氧，新生態氧可氧化四甲基聯苯膠成聯苯胺藍。聯苯胺藍自我脫氫氧化形成棕色的四甲基苯釀二胺，后者與亞硝基鐵氧化納結合，再進一步氧化形成穩定的藍色顆粒，沉淀于細胞質內酶所在的部位。
試劑器材
1.1%TMB(3,5,31,5f一四甲基聯苯膠)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶內，冰箱保存。
2.亞硝基鐵氧化鍋飽和溶液在少量蒸餾水中加入亞硝基鐵氰晶體，至不再溶解為止，置棕色瓶內，冰箱保存。
3.1%過氧化氫溶液取30%H2021mL加入蒸館水29mL。
4.稀過氧化氫溶液1%H2021滴，加10 mL蒸餾水稀釋(新鮮配制)。
5.瑞氏(Wright)染色液。
6.新鮮涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光學顯微鏡等。
操作步驟
1.取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10μL，溶液呈淡棕黃色，染色液應臨用前配制。
2.在新鮮干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹勻，染色6min。
3.自來水沖洗，待干，用瑞氏染液復染15~20 min。
4.自來水沖洗，待干，用油鏡鏡檢。
注意事頂
1.血涂片或骨髓涂片應新鮮制作，涂片應厚薄適宜。
2.TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果較好，勿用90%~95%乙醇，否則細胞表面蛋白質很快凝固，妨礙試劑向胞內滲入而導致染色效果差。
3.H202需新鮮配制，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細胞看不見陽性顆粒，紅細胞呈棕色或綠色，即表示H202過濃。若H202加于血片上不產生氣泡，則示無效。
4.染色液pH應為5.5。
5.試劑應置于低溫暗處，防止因光線照射而失效。
實驗評價
1.POX染色是鑒別急性白血病類型最重要最常用的細胞化學染色方法，臨床上不管是哪種急性白血病，首先做POX染色，以區分是急性髓細胞白血病還是急性淋巴細胞白血病。如變異型的急性早幼粒細胞白血病極易誤診為急單、急粒中如以小型原粒細胞為主者極易誤認為急淋等。在判讀細胞POX染色結果前，要先觀察成熟粒細胞是否呈強陽性，以判斷染色是否成功。
2.POX陽性說明是急性髓細胞白血病(陽性較強常見于急性粒細胞白血病，弱陽性常見于急性單核細胞白血病)；陰性說明各種急性白血病的可能性均有。因原始細胞多表現為陰性反應，故本法對白血病的分型有一定的局限性，特別是對某些分化極差的白血病，可能失去鑒別意義。
3.四甲基聯苯胺法操作簡單，染色效果較好，試劑無致癌作用，但對染液pH要求較高，如pH<5.0會導致假陽性結果。