常用血細胞化學染色12

二、氯乙酸AS-D荼盼醋酶染色

染色原理

血細胞內的氯乙酸AS-D荼酚酯酶(naphythol AS-D chloroacetate esterase, NAS-DCE)水解基質液中的氯乙酸AS-D荼酚，產生AS-D荼酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。

試劑器材

1.10%甲醛甲醇固定液

甲醛 25mL

甲醇 75mL

混合后置4℃冰箱保存。

2.Veronal醋酸緩沖液

甲液：

醋酸鈉(含3H2O) 1.94g

巴比妥鈉 2.94g

蒸餾水 100mL

乙液：

0.1mol/L鹽酸 取鹽酸(比密1.190g/L)0.85mL加蒸餾水至100mL。

取甲液50mL，乙液45mL，再加蒸餾水135mL，用1mol/L鹽酸調pH至7.5~7.6。

3.基質液

氯乙酸AS-D荼酚 100mg

丙酮 0.5mL

蒸餾水 5mL

Veronal醋酸緩沖液 5mL

固醬紫GBC鹽 10 mg

不必過濾立即染色，一次用完。

4.蘇木素染液。

操作步驟

1.固定新鮮干燥的涂片在固定液中30 s~1min，蒸餾水沖洗，待干。

2.顯示放入基質液(37℃)30min，自來水沖洗。

3.復染蘇木素染液復染5mn，自來水沖洗，待干，鏡檢。

注意事頂

1.冬季室溫低，茶酚和固醬紫GBC鹽不易溶解，可放37℃溫箱促溶。

2.茶酚在丙酮中溶解后再加其他液體。

3.NAS-DCE不被氟化鈉抑制。

4.此酶染色后的標本易脫色，不能長期保存。

實驗評價

NAS-DCE陽性反應幾乎僅出現在粒細胞、較POX染色更具有特異性，因此又稱為"粒細胞酯酶"、"特異性酯酶"。故該酶較特異地識別粒細胞系，有助于急粒和急單的鑒別，特別是對某些POX反應較強的單核細胞白血病鑒別意義更大。