酵母表達系統作為一種后起的外源蛋白表達系統,由于兼具原核以及真核表達系統的優點,正在基因工程領域中得到日益廣泛的應用,應用此系統可高水平表達蛋白,且具有翻譯后修飾功能,故被認可為一種表達大規模蛋白的強有力的工具。
常用的酵母表達系統:
一、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)表達系統:
釀酒酵母(Saecharomycescerevisiae)在釀酒業和面包業的使用已有數千年的歷史,被認為是GRAS(generally recognized as safe)生物,不產生毒素,已被美國FDA確認為安全性生物,但釀酒酵母難于高密度培養,分泌效率低,幾乎不分泌分子量大于30 kD的外源蛋白質,也不能使所表達的外源蛋白質正確糖基化,而且表達蛋白質的C端往往被截短。因此,一般不用釀酒酵母做重組蛋白質表達的宿主菌
二、甲醇營養型酵母表達系統:
甲醇酵母表達系統是應用最廣泛的酵母表達系統。甲醇酵母主要有漢森酵母屬(Hansenula),畢赤酵母屬(Pichia),球擬酵母屬(Torulopsis)等,并以畢赤酵母屬(Pichia)應用最多。
甲醇酵母的表達載體為整合型質粒,載體中含有與酵母染色體中同源的序列,因而比較容易整合入酵母染色體中,大部分甲醇酵母的表達載體中都含有甲醇酵母醇氧化酶基因—1(AOX1),在該基因的啟動子(PAOX1)作用下,外源基因得以表達。甲醇酵母一般先在含甘油的培養基中生長。培養至高濃度。再以甲醇為碳源。誘導表達外源蛋白。這樣可以大大提高表達產量。利用甲醇酵母表達外源性蛋白質其產量往往可達克級。與釀酒酵母相比其翻譯后的加工更接近哺乳動物細胞,不會發生超糖基化。
酵母表達的特點酵母是一種單細胞低等真核生物,培養條件普通,生長繁殖速度迅速,能夠耐受較高的流體靜壓,用于表達基因工程產品時,可以大規模生產,有效降低了生產成本。