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  • 發布時間:2021-04-26 18:15 原文鏈接: 常見發光免疫分析技術的比較(三)

           2.3.3 其它物質的檢測:還可對其他一些微量物質進行測定,如維生索、葉酸、免疫球蛋白及酶類,人免疫球蛋白、人血清清蛋白、人中性粒細胞溶菌酶、葡萄糖和除草荊等。

           2.4 評價:電化學發光是一種電促發光技術,采用的是特殊的化學發光劑Ru(bpy)3+作為標記物并在發光反應中循環使用,既避免了同位素的半衰期短及放射蝕危害,又克服了酶標記的不穩定性,而標記物很穩定,在室溫下半衰期大于1年;同時還結合了90年代初期問世的鏈霉親和素的新型固相技術,不但使檢測的融敏度大大提高,而且還可自動分離游離相和結合相,使檢測更易實現自動化。電化學發光的反應時間僅為20 min,而且標準曲線儲存在條碼中,每次測定只需一點標定,Ru(bpy)3+的穩定性很好,在室溫下半衰期長達1年。這些優點決定了操作的快速、簡捷,無需經常校正。

           因此該技本與其它的分析手段比較,在免疫學檢測中有顯著的優勢。它的優點除了靈敏度高、特異性強、檢測快速外,更為可取的是所用試劑毒性低,無放射性危害,并且有良好的穩定性。以最易受影響的促甲狀腺素為例,35℃3周后,電化學發光試劑仍然穩定。電化學發光分析方法多樣,適用面較大,廣泛地應用于抗原、半抗原和抗體的免疫梭測。其線性范圍也較寬,符合臨床檢驗的需要。耐它與普通的化學發光比較,前者為電促發光,在電極表面通過三角形脈沖電壓的激發產 生穩定、連續、高效的發光,后者則是標記辣根過氧化物酶作用下催化化學發光劑(如魯米諾、吖啶酯等產生不穩定、間斷、閃爍性的發光),基反應過攘中容易發 像裂變恧使結果不穩定。電億學發光測定的照光度裰據釋放光子的波長仍屬熒光測定酶范疇,但與直接的熒光發光不同,熒光發光的靈敏度受熒光發光的本底和光學部件散射光的影響,適應范圍也較低。

           電化學發光技術的發展趨向在于合成新的發光標記物、優化標記技術和免疫分析方法,從而追蹤生命科學發展的前沿領域,建立對生命過程有重要意義的內源性和外源性物質的分析方法。

           2.5 代表儀器:目前生產電化學發光儀的廠家較少,主要生產廠家是瑞士羅氏診斷公司,與德國BoehringerMannheim寶靈曼公司公司合 作,Elecsysl0lO/20lO,ROCHE 2010系列全自動電化學發光免疫分析儀(ORIGEN分析儀)。標本可隨時插入常規操作中并優先測試,也為臨床急診測定提供了方便。

           3、時間分辨熒光

           3.1 時間分辨熒光免疫分析(TR-FIA)TR-FIA是將三價稀土鑭系離子銪(Eu),釤(Sin)等通過絡合物標記到抗原或抗體分子上,并通過檢測其熒光實現免疫分析。由于稀土離子熒光的激發光波長范圍較寬,而發射光波長范圍較窄,而且激發光和發射光之間的波長差距較大,特別是熒光壽命大大長于常規熒光。因此它采用了與常規熒光免疫不同的檢測方式,即通過脈沖激光器間歇激發樣品,同時檢測器在其激發的間隙測定特定波長的熒光強度。這樣不僅消除了雜散光的干擾,而且也大大減弱了樣品及反應杯中雜質所產生的背景熒光干擾。所以其檢測靈敏度和線性范圍大大高于常規熒光。

           3.2 解離增強時間分辨熒光免疫分析法(DELFIA) 由于稀土離子在水相中的熒光效率很低,因此需要將其包裹在一個非水相的環境中才能檢測到理想的熒光強度。最常見的做法是在檢測前先用酸將稀土離子從標記抗原或抗體七解離出來,由一系列表面活性劑構成的微囊吸收并包裹稀土離子,這種方式稱為DELFIA,其中的酸和表面活性劑等被稱為增強劑。迄今為止,在所有的時間分辨熒光免疫分析法中,這種方法的靈敏度是最高的,因此近年來得到了廣泛應用,已經成為目前最常見的時間分辨免疫分析技術。

           3.3 直接時間分辨熒光測囂法由于該方法需要在常規免疫分析中的洗滌步驟后還要進行熒光素的解離和增強操作,因此分析步驟有些冗長繁瑣。時間分辨熒光免疫分析最大的不足是環境及樣品中同類元素導致的本底干擾。作為稀土資源大國的中國,這一點尤其不容忽視,特別對北方地區更為重要。雖然可以通過實驗用水和實驗室環境的特殊凈化杜絕一部分干擾,但會帶來運行成本的提高;況且由于患者體內這類元素的積累而造成的臨床標本污染根本無法消除。因此人們研究開發了另一種稱為直接時間分辨熒光測量法的技術,也有人稱之為后標記技術。它首先使用一種不含稀土元素的特殊絡合物標記抗原或抗體,等常規免疫分析中的洗滌完成后,再加入稀土元素并進行測定,這樣就基本掩蔽了同類元素導致的本底干擾。但其靈敏度較低,目前還不能與上述兩種方法相抗衡。除上述方法外,還有一種固 相時間分辨熒光法,它是使用一種特殊的絡合物將三價稀土離子標記到抗原或抗體分子上,同時該絡合物還可以維持三價稀土離子周圍的非水相環境,因此也充當了增強劑的角色。該方法的特點是無需增強劑,故操作簡單,但靈敏度度低于上述DELFIA。


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