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  • 發布時間:2020-02-25 23:04 原文鏈接: 常見實驗用溶液的配制方法(一)

      一.常用貯液與溶液

      1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

      1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

      10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。

      10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學試劑級,無DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,

      須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動,直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

      1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃。或轉移100mg的二硫蘇糖醇

      至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

      8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

      1mol/L氯化鉀(KCl):溶解7.46g氯化鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

      3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

      0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

      1mol/L HEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。

      1mol/L HCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

      25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。

      1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2?6H2O于足量的水中,定容到100ml。

      100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20℃。

      20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

      10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調pH至7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套)

      5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。

      10N氫氧化鈉(NaOH):溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

      10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

      2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。

      100%三氯乙酸(TCA):在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。(稀釋液應在臨用前配制)

      2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用鋁箔包裹裝液管,貯存于-20℃。

      100×Denhardt試劑(Denhardt"s regent)

    成分及終濃度

    配制100ml溶液各成分的用量

    2%聚蔗糖(Ficoll,400型)
    2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)
    2%BSA(組分V)
    水

    2g
    2g
    2g
    加水至總體積為100ml

      依照上表稱取各組分,溶于水中定容。過濾除菌及雜質,分裝成小份于-20℃貯存。

      10×標準DNA連接酶緩沖液(standard DNAligase buffer)(粘端、平端連接)

    成分及終濃度

    配制10ml溶液各成分的用量

    0.5mol/L Tris-HCl
    100mmol/L MgCl2
    100mmol/L DTT
    2mmol/L ATP
    5mmol/L 鹽酸亞精胺(可選)
    0.5mg/ml BSA(組分V)(可選)
    水

    5ml 1mol/L 貯液
    1ml 1mol/L 貯液
    1ml 1mol/L 貯液
    200ul 100 mmol/L 貯液
    50ul 1 mmol/L 貯液
    0.5ml 10 mg/mL 貯液
    2.25ml

      將配制好的緩沖液分裝成小份,貯存于-20℃。

      100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)

      可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液,-80℃可貯存至少6個月。

      10mmol/L dNTP混合液

    成分及終濃度

    配制20ul溶液各成分的用量

    10mmol/L dATP
    10mmol/L dCTP
    10mmol/L dGTP
    10mmol/L dTTP
    水

    2ul 100 mmol/L dATP 貯液
    2ul 100 mmol/L dCTP 貯液
    2ul 100 mmol/L dGTP 貯液
    2ul 100 mmol/L dTTP 貯液
    12ul

      20%PEG 8000/2.5M NaCl

    成分及終濃度

    配制10ml溶液各成分的用量

    質量濃度為20%聚乙二醇
    2.5mol/L 氯化鈉
    水

    20g
    50ml 5 mol/L 氯化鈉或 14.6g 固體氯化鈉
    補足100ml

      加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中,加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解。

      20×SSC

    成分及終濃度

    配制1L溶液各成分的用量

    300mmol/L 檸檬酸三鈉(二水)
    3mol/L 氯化鈉
    水

    88.2g
    175.3g
    補足1L

      溶解檸檬酸三鈉(二水)和氯化鈉于約0.9L水中,加幾滴10N NaOH溶液調pH為7.0,用水補足體積至1L。

      DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水

      加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的體積分數為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應,不可用DEPC處理Tris緩沖液。

      甲酰胺(deionized formamide)

      直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份,充氮氣于-80℃貯存(防止氧化)。

      磷酸緩沖液(phosphate buffer)

      按照下表所給定的體積,混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿)貯液,獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉(Na2HPO4?H2O)貯液:溶解138g于足量水中,使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。

    1mol/L 磷酸二氫鈉(ml)

    1mol/L 磷酸氫二鈉(ml)

    最終pH值

    877
    850
    815
    775
    735
    685
    625
    565
    510
    450
    390
    330
    280

    123
    150
    185
    225
    265
    315
    375
    435
    490
    550
    610
    670
    720

    6.0
    6.1
    6.2
    6.3
    6.4
    6.5
    6.6
    6.7
    6.8
    6.9
    7.0
    7.1
    7.2

      TE(用于懸浮和貯存DNA)

    成分及終濃度

    配制100ml溶液各成分的用量

    10mmol/L Tris-HCl
    1mmol/L EDTA
    水

    1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)
    200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
    98.8ml


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