1
為了解決前述模型存在的問題,本模型將高濃度的福氏佐劑(含有300mg結核菌素)直接注射到大鼠后肢踝關節腔中(注射體積為0.05ml),從而導致一個具有急性、慢性兩相的高度局限的關節炎癥。具體制作方法如下:
將50毫克滅活結核菌素加入由6ml石蠟油、4ml生理鹽水和1ml吐溫80組成的混和物中,充分混和并在120°C下高壓處理20分鐘。然后冷藏保存,至使用前加溫并徹底混和。
注射時,在麻醉下將動物后肢踝關節伸展,在外踝后的凹陷處刺入注射針頭,然后轉向足趾方向,在脛骨、腓骨和距骨之間的縫隙處刺入踝關節囊。刺入大約3mm時可體會到落空感,此時推注福氏佐劑。若確實刺入關節囊,則在推注0.05ml之后將感到極強的阻力。
該模型在注射后第1周內出現急性炎癥,以紅腫、體重增長減慢、直立行為減少和運動減弱為特征;第3周開始出現慢性炎癥。痛行為表現為探索和直立行為顯著減少,PWT顯著降低而呈現痛敏狀態,運動減弱現象也進一步加重。此時屈、伸關節評分(將動物肢體作被動屈伸,屈曲時出現縮腿反應為1分,出現嘶叫也為1分,共2分,反復5次計算總分;伸展時亦做同樣評分)也顯著增高,提示存在明顯的痛敏。
小結
如上所述,在三類關節炎模型中,多發佐劑性關節炎的發病率較低,動物全身病變較為嚴重,且常涉及其它系統尤其是中樞神經系統的病變,對于神經系統功能研究會有一定程度的影響。這種模型也常受到國際動物保護組織的批評。單發性關節周圍炎模型制作簡單,發病局限,但炎癥持續時間較短,可用于短期疼痛的神經機制研究,但作為長期的慢性痛模型并不適當。單發佐劑性關節腔炎模型持續時間長,其臨床癥狀比較易于定量研究,且發病只局限于關節局部,是一種進行長期慢性炎癥痛狀態下神經系統功能改變的理想模型。
神經痛模型
神經源性痛指由外傷或疾患導致的外周神經、脊髓背根、脊髓或腦內某些區域的病損所致的疼痛。它具有幾種不同類型的特征性異常痛感覺。自發痛最為常見,可能是持續的表面灼痛,或深部的酸痛;也可表現為電擊樣的發作性痛。患者常表現為對熱、冷及機械刺激的痛敏和痛覺異常(指將通常的非痛刺激感受為疼痛)。神經源性痛的機理不明,臨床治療效果也常不令人滿意。
由于臨床癥狀的千變萬化,對神經源性痛進行臨床研究是很困難的。因此,在實驗動物身上重現這種狀況對于有關研究具有重要意義。人們已經制備了幾種有關的動物模型,可以很好地模擬幾種神經源性痛。
中樞神經系統損傷性神經源性痛模型
在人類,腦和脊髓某些部位的損傷可導致中樞性疼痛。現在已知所謂“丘腦痛”是由于丘腦、腦干或皮層損傷(一般是由于腦血管意外)造成的;但在動物模型中類似情況的研究相對較少。
脊髓損傷也可以導致嚴重的神經源性痛。目前有兩種有關的大鼠模型。應用得最多的是Hao等提出的光化學損傷模型。動物在麻醉下做一側頸靜脈插管。然后在背部中線切開皮膚,暴露T8-T12節段的椎體。將Erythrosin
B染料溶解在生理鹽水中作靜脈注射,在5分鐘內達到32.5mg/kg體重的劑量。注射后,動物立即置于波長為514.5nm的氬離子激光照射之下,將刀口形激光束對準T10節段椎體(相當與脊髓T11~12)照射1、5或10分鐘。所用的激光為平均功率0.16瓦,頻率500赫茲的脈動激光(最大鋒功率2.4瓦)。為避免組織過熱,用最大風速為6米/秒的電風扇盡可能靠近脊柱(距離約5mm)開動。照射期間用加熱板將動物體溫控制在37至38°C之間。此處理可導致血管內的光化學反應,導致脊髓缺血性損傷。照射之后動物出現明顯的異常痛覺,輕觸即可導致動物嘶叫,輕刷體側即可引起明顯激惹。在此期間用von
Frey毛所引出的機械壓力嘶叫閾明顯降低,部分動物還出現自發嘶叫。這種異常痛覺可持續數小時至數日。異常痛覺的程度及持續時間與照射時間沒有明顯關系。而且盡管照射1分鐘并無可見的脊髓損傷,異常痛覺仍舊出現。該模型的異常痛覺在照射后4小時可為2mg/kg**所消除(與假手術動物的一過性異常痛覺現象相同),但24~48小時之后即使用較大劑量**(5mg/kg)亦無法消除異常痛覺。