平滑肌細胞的分離和培養

0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液

平滑肌培養液

Petri培養皿手術刀和10號手術刀片解剖剪組織鑷

1. 從小牛取胸主動脈。

2. 將胸主動脈浸入 Hanks 液。

3. 分離細胞之前將動脈放在冰上。

4. 將動脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養皿。

5. 用解剖剪沿長軸剪開動脈。

6. 用手術刀片輕刮動脈內腔面，以除去內皮細胞。

7. 將動脈的中膜與內膜和外膜分離。

8. 將中膜切成約 1 cm² 大小的組織塊。

9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養皿，內膜側朝下。

10. 讓組織塊貼壁約 10 min。

11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM（平滑肌培養液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素）。

12. 將組織塊放入濕潤的培養箱，在 37°C 和 10% CO₂ 條件下孵育。

13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿讓組織塊去附著。

14. 將組織塊繼續孵育 10 d。此后，平滑肌細胞從組織塊遷移出來，并變為單層。

15. 細胞生長接近形成單層時，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。