應用固相萃取（一）

摘 要 本文建立了應用固相萃取－高效液相色譜法（SPE-HPLC）測定飼料中磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉等五種磺胺類藥物的方法。考察了氧化鋁小柱的最大飽和容量及洗脫條件，優化了色譜條件：流動相為乙睛和水（25:75,v/v）,流速為1.0mL/min，檢測波長為270nm。在優化條件下，方法檢出限為0.1μg/mL，線性范圍在0.2μg/mL～200μg/ mL之間，線性相關系數高于0.9996。將該方法用于雞配合飼料、豬配合飼料和濃縮飼料中磺胺類藥物殘留的測定，不同添加濃度的回收率均高于80%，相對標準偏差≤10％，能夠滿足實際樣品的分析要求。

關鍵詞 固相萃取；高效液相色譜法；磺胺類藥物；

1．引言

磺胺類藥物（Sulfonamides, SAs）都具有對氨基苯磺酰胺結構，廣泛用于預防和治療細菌感染性疾病。集約化養豬場常用抗生素藥物混入飼料中防治疫病,磺胺類藥物其比例一般是:預防量100—200PPM,治療量300-500PPM。

磺胺類藥物的測定方法報導的文獻有很多，基本上都是用高效液相色譜或液質的方法測定動物組織、血液、蛋、奶、蜂蜜中的7-11種磺胺。過程相差不大：有機相除蛋白→乙睛提取→堿性氧化鋁SPE柱凈化→濃縮→高效液相色譜紫外檢測（或柱后衍生，熒光檢測）或高效液相色譜-質譜檢測。由于飼料樣品成分的多樣性和復雜性使得測定其中磺胺類藥物難度較大，文獻報導也較少。在這篇文章中，我們詳細的闡述了用乙腈作為提取劑、通過堿性氧化鋁SPE小柱凈化后反相高效液相色譜儀紫外檢測器檢測飼料產品中五種磺胺的殘留量。

2．實驗部分

2.1儀器

WATERS600型高效液相色譜儀，C18色譜柱（5μm  ，250mm×4.6mm）。選用乙睛和水作為流動相，乙睛和水體積比例為25:75,流動相的流速為1.0mL/min；WATERS474二極管陣列檢測器,波長為270nm；WATERS  717plus 自動進樣器，進樣量 為 20μL。

2.2 試劑及材料

乙腈和甲醇為色譜純（Fisher公司）；冰醋酸為優級純（國產）；其它試劑為分析純，國產，

未進一步處理直接使用。磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉標準品（Sigma公司，純度>99%）；堿性氧化鋁SPE 小柱:Speed SPE Cartridges Alumina Basic ALB (ABI公司) ，規格為1000mg/12mL；

2.3 標準溶液的配制

分別配制五種磺胺的標準貯備液，濃度為1mg/mL，乙腈溶解（注：磺胺喹惡啉用甲醇溶解）。－20℃冰箱保存一個月。標準工作液現用現配，用流動相定容。

2.4 樣品前處理

2.4.1提取  稱取配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混合飼料樣品2g，置于具塞錐形瓶中，加入50 mL的乙睛于振蕩器振蕩提取30min，過濾，濾液備用。

2.4.2 凈化  準確吸取試液(２.4.1)：配合飼料10～20mL；濃縮飼料、添加劑預混合飼料2 mL,移入用10mL乙睛淋洗過的堿性氧化鋁小柱中,令其自然流速流出。待試液全部流出后，吹干，用兩次2mL流動相洗脫，收集洗脫液, 并過0.45um的濾膜，濾液上機測定。

3.結果與討論

3.1色譜條件的優化

考察了乙睛+水+冰乙酸流動相體系，結果如圖所示（見下圖）。通過色譜圖可知，在乙睛，水和冰乙酸體積比為75：25：3時最為適宜。在此條件下，五種磺胺類藥物能夠達到基線分離。另外，金霉素、青霉素等藥物對其無干擾。

3.2 分析性能  

在優化條件下，磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉等五種磺胺類藥物在0.2～200μg/mL濃度范圍內，濃度與響應強度具有良好的線性關系，線性相關系數高于0.999，相對標準偏差（RSD）小于5%。結果見表2：

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