應用CTCBIOPSY?平臺分離CTC探討鼻咽癌患者循環腫瘤細胞與EB病毒激活狀態的關系
導語：
EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）被證實與越來越多的惡性腫瘤相關而受到人們的關注，目前鼻咽癌循環腫瘤細胞（Circulating tumor cell，CTC）的研究及其臨床意義并不明確，本文中研究人員使用CTCBIOPSY?平臺分離CTC，并結合下游生物學技術探討了鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）患者中CTC與EBV之間的關系。
背景介紹：
鼻咽癌是頭頸癌中最常見的惡性腫瘤，CTC作為一個在多數腫瘤中極有潛力的預后指標，目前在鼻咽癌中的研究卻非常少。EBV（Epstein-Barr
virus）由Epstein和Barr于1964年首次成功建株，又稱人類皰疹病毒4型（Human herpesvirus
4，HHV-4)，是多種惡性腫瘤（如鼻咽癌）的病因之一，它主要感染人類口咽部的上皮細胞和B淋巴細胞，EBV的激活是鼻咽癌進展中的一個常見事件。本研究使用濾膜分離的方法富集鼻咽癌患者外周血中的CTC，并探討了鼻咽癌患者中循環腫瘤細胞與EB病毒激活狀態間的關系。
研究內容：
本研究入組了33名未分化型非角化性NPC患者，在患者進行初始治療前采集5mL靜脈血，并使用CTCBIOPSY?平臺（芝友醫療）對血樣進行分離染色，然后采用細胞形態學原理在光學顯微鏡下對CTC進行鏡檢計數，3個以上聚集成團的CTC稱為CTM（Circulating
tumor
microemboli），隨后將濾膜上已染色的細胞脫色后進行免疫組織化學染色（Immunohistochemistry，IHC)，IHC檢測的標志物為CK5/6及P63。EBV
的DNA載量和VCA-IgA（病毒衣殼抗原）、EA-IgA（早期抗原）水平是EBV激活的重要指標。研究人員隨后在濾膜上使用原位雜交方法檢測了CTC中的EBERs（EBV-encoded
RNAs），EBER原位雜交是確定EBV與疾病關系的公認標準方法。在33例鼻咽癌患者中，22例（66.7%）檢測出CTC（平均值為2.06）（圖1）；2例（6.1%）（T3N3M0）檢測出CTM，在所有TMN分期的NPC患者中均有CTC檢出，CTC檢出與TNM分期無顯著相關性。CTC的檢出和EBV的激活狀態相關。在全部NPC患者和未發生遠端轉移的NPC患者中，CTC陽性患者的EBV的VCA-IgA水平高于CTC陰性患者（全部NPC患者陽性vs.陰性：4.86
vs. 3.88，P=0.016；未發生遠端轉移的NPC患者陽性vs.陰性：4.95 vs. 3.76，P=0.009
），CTC的檢出數量與EBV的VCA-IgA水平和DNA載量相關。
圖1 鼻咽癌患者中CTC檢出圖
圖2 鼻咽癌患者中CTM檢出圖
圖3 鼻咽癌CTC的IHC染色圖
A) CK5/6染色 B) P63染色
圖4 鼻咽癌CTM的EBERs原位雜交圖
研究結論：
在不同TNM分期的NPC患者中，CTC和CTM均有較高的檢出率，且CTC檢出與EBV激活狀態有關，CTC檢出數量與患者的EBV激活狀態呈正相關。使用CTCBIOPSY?平臺，結合免疫組化、原位雜交等技術，可以對腫瘤患者外周血中的CTC進行更多的下游生物學研究分析。
本文系中山大學腫瘤防治中心課題組與芝友醫療合作的研究成果！
原始出處：
He
C, Huang X, Su X, Tang T, Zhang X, Ma J, et al. The association between
circulating tumor cells and Epstein-Barr virus activation in patients
with nasopharyngeal carcinoma. Cancer biology & therapy. 2017:0.