實驗方法原理
異檸檬酸脫氫酶(NADP+),異檸檬酸:NADP+ 氧化還原酶(脫羧)。
D-異檸檬酸 + NADP+ → CO2 + 2-酮戊二酸 + NADPH + H+
這里所描述的實驗步驟用 NADP,可以用 NAD 來代替,也可以用異檸檬酸脫氫酶(NAD +),異檸檬酸:NAD + 氧化還原酶(脫羧)來代替。
實驗材料 異檸檬酸脫氫酶溶液
試劑、試劑盒 咪唑-HClNADPMgCl2異檸檬酸溶液
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.98 ml 實驗混合物
0.02 ml 酶溶液
25℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低。NADPH 的吸收系數 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事項
其他
試劑:
0.1 mol/l 咪唑-HCl,pH 8.0
0.01 mol/l NADP(Mr=787.4;79 mg 溶于10 ml 水中)
0.1 mol/l MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于10 ml 水中)
0.025 mol/l 異檸檬酸溶液(異檸檬酸,三鈉鹽,Mr=258.1;65 mg 溶于 10 ml 水中)
異檸檬酸脫氫酶(原料溶液,10 mg/l,使用前稀釋 100 倍)