5.需要什么級別的引物？
答：引物常用的純化方式C18脫鹽，OPC純化，PAGE純化，HPLC純化。根據實驗需要，確定訂購引物的純度級別。
應用 引物長度要求 純度級別要求
一般PCR擴增 < 45base OPC
>45 base PAGE
診斷PCR擴增 < 40base OPC, PAGE
DNA測序 20base左右 OPC
亞克隆，點突變等 根據實驗要求定 OPC, PAGE，HPLC
基因構建（全基因合成） 根據實驗要求定 PAGE
反義核酸 根據實驗要求定 PAGE
修飾引物 根據實驗要求定 PAGE, HPLC
6.最長可以合成多長的引物？
答：引物越長，出現問題的概率就越大。我們合成過120base的引物，但是產率很低。除非需要，建議合成片段長度不要超過80mer,按照目前的引物合成效率，80mer的粗產品，全長（還不一定正確）引物的百分比不會超過40%，后續處理還有丟失很多，最后的產量是很低。
7.需要合成多少OD數？
答：根據實驗目的確定。一般PCR擴增，2 OD引物，可以做200-500次50ul標準PCR反應。如果是做基因拼接或退火后做連接，1 OD就足夠了。但是有些研究人員，就做幾次PCR，但是卻要5-10 OD。做全基因構建的引物都比較長，但是我們有些研究人員也要求高OD數。片段越長, 最后全長得率就越低，出錯的幾率就越大。超出需要之外的OD數要求，其實也是對社會資源的一種浪費，同時也從一個側面反映了部分研究人員，特別是新手的自信心不足，總覺得需要重復多次才能成功。
8.如何檢測引物的純度？
答：實驗室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝膠進行電泳。取0.2-0.5OD的引物，用尿素飽和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到飽和，上樣前加熱變性(95℃,2mins)。加入尿素的目的一是變性，二是增加樣品比重，容易加樣。600V電壓進行電泳，一定時間后(約2-3小時)，剝膠，用熒光TLC板在紫外燈下檢測帶型，在主帶之下沒有雜帶，說明純度是好的。如果條件許可，也可以用EB 染色或銀染方式染色。
9.如何計算引物的濃度？
答：引物保存在高濃度的狀況下比較穩定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 溶解前您需要核對合成報告單和引物標簽上的引物OD數是否一致。如果不一致，請和我們聯系。我們可以根據生產記錄查到實際產量是多少。
一般情況下，我們建議將引物的濃度配制成50pmol/ul，加水的體積（微升）按下列方式計算：V (微升)= OD數*（乘）33 *（乘）*（乘）20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以從合成報告單上獲得。如果需要配制成其他濃度，按上述公式換算。
注意：1 OD260= 33 ug/ml.
10.如何計算引物的Tm值？
答：引物設計軟件都可以給出Tm，引物長度，堿基組成，引物使用緩沖的離子強度有關。
長度為25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
對于更長的寡聚核苷酸，Tm計算公式為：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
公式中，Size = 引物長度。
Tm的定義：Tm = Temperature at which 50% of a given oligonucleotide is hybridized to its complementary strand. In the absence of destabilizing agents, like formamide or urea, Tm will depend on 3 major parameters: The sequence: a GC-rich sequence has a higher melting temperature. The strand concentration: high oligonucleotide concentrations favor hybrid formation, which results in a higher melting temperature. The salt concentration: high ionic strength results in a higher Tm as cations stabilize the DNA duplexes.