tm值和引物中的GC含量有關 只要相差不是太大就行 設定時取平均值就可以;你可以根據引物的長度和GC的百分比來確定一下哪個更準確。不知道你用的那個公司的機器,一般是的在退火溫度后面的空格里,輸入你每個循環升或降的溫度,后面還有加減號代表升或降。