強致癌物質黃曲霉毒素M1檢測（二）

免疫柱凈化步驟：完全符合GB/T 18980-2003

┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。

┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調節壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

┅┅準確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測。

注：收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。

HPLC 檢測需要儀器與耗材

酶聯免疫檢測法：符合國家標準

酶聯免疫檢測法采用競爭ELISA，在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。

樣品處理

牛奶 直接離心取上清液用于檢測

奶粉及其他固狀奶制品：需要溶解于去離子水中，離心取上清液用于檢測

試劑盒檢測時間：30分鐘＋30分鐘

交叉反應率：

ELISA 方法檢測需要：

　　分析人員要求：

化學分析儀器及其相關專業或有高效液相色譜儀操作經驗的人員。