然而,在活體成像過程,并不是總能保持各方面因素都達到最佳狀態,那么在這種情況下,應該從哪些方面考慮,去獲得高質量的圖片呢?北京博益偉業儀器有限公司通過對一系列的實驗結果分析后,建議:
首先:構建帶有強啟動子的融合表達蛋白。這是整個活體成像的第一步,也是最重要的一步。從上面的分析可以看出,啟動子的強弱對于最終圖片的獲取影響甚大,強啟動子對熒光強度的提高,是任何只從CCD性能方面進行改進所無法比擬的。
另外,值得注意的是,在進行平板預實驗時,一定要將整個的實驗過程嚴格控制,包括細胞的個數,底物的濃度以及環境的溫度等。其中,環境溫度有時會被忽視,但真正的成像是在體內進行的,如果平板實驗的溫度不準確,不處于酶和底物作用的最佳溫度,那么就可能會導致獲得結果的不準確性,造成下一步體內注射細胞的偏差,影響實驗結果。下圖是不同溫度下,同樣的細胞系,同樣的個數獲得的結果,可以看到,在溫度降低后,能檢測到的細胞個數明顯減少。而這個結果實際上并不是CCD靈敏度發生了變化,而是環境溫度的原因。

第二:在所采用的細胞系無法更改或提高其表達蛋白的能力時,應該考慮延長曝光時間。對于CCD成像來講,獲得的光子信號有一個累加效應,因此,當曝光時間增強時,微弱的光子信號得到了累加,從而可以被檢測到。
第三:曝光時間的延長,不僅增加了目的信號,對于噪音也存在一個累加效應,為了避免這種情況,可以適當的增加bin 值,即采用高大像素點進行拍攝,這樣獲得更多的光子信號,適用于微弱信號的拍攝。
總之,了解了小動物活體成像系統的原理,以及影響成像的一些相關因素后,能夠幫助研究人員更容易獲得高質量的圖片,進而形成一篇好的科學論文。不過,儀器只是論文成功的助因,最重要的決定因素還是在于文章是否具有創新性,以及文章整體內容的豐富程度和含金量,希望我們的儀器能為科研工作者的文章增色許多。
北京博益偉業儀器有限公司 宋蓮芬
中國醫學科學院實驗動物研究所
致謝:
本文的部分實驗是在中國醫學科學院實驗動物研究所完成的,實驗的過程中,得到了張連鋒老師的大力支持和幫助,在此,對張老師致以誠摯的謝意。