影響血細胞分析儀準確性的因素探討

一、標本處理方法對結果的影響
1、采血部分
      血液分析一般要求用抗凝的靜脈血，盡可能不用末梢皮膚穿刺采血。因為不同部位皮膚穿刺血的細胞成分及細胞與血漿的比例常不一致，與靜脈血的差別更大 。從技術角度講，毛細血管采血量較少，全自動的血液分析儀需血量較大，不易采到足夠量，更不能在需要的時候進行重復檢查，因此除了少數不易取靜脈血如嬰兒、大面積燒傷的病人及某些需要經常采血檢查的病例，如白血病、腫瘤放療或化療病人外，均應采用靜脈血檢測。
2、容器的選擇
      存放抗凝血的容器應盡量采用密閉式的，以防止水分蒸發或環境污染等方面的影響。為了減少對血小板分析的影響，應使用塑料試管，采血后應立即混勻。如果采用玻璃制品應首先對容器進行硅化處理，以防止血小板黏附，造成血小板計數的減少。目前在發達國家普遍使用真空采血系統，這一系統使標本在采血和測試期間完全與外界隔離，避免空氣或異物污染血液，也防止發生溶血，提高檢測準確性，同時也防止采血及檢驗人員因直接接觸血液而受到感染的危險。
3、抗凝劑
      國際血液標準化委員會（ISCH）推薦使用的抗凝劑是EDTA二鉀，含量規定為1.5-2.2mg/ml血。此抗凝劑不影響白細胞計數及大小，對紅細胞形態影響也最小，并且可以抑制血小板的聚集。EDTA二鈉用于血常規檢查與EDTA二鉀抗凝血的結果相比無明顯變化，但其溶解度較低，抗凝速度慢，不適合末梢血的抗凝。
      需要注意的是EDTA二鉀可以使紅細胞體積輕度膨脹，采血后短時間內MPV非常不穩定，半小時后方趨于平穩。枸櫞酸鹽類抗凝劑對MPV及其他凝血因子影響極小，可用于血小板的分析。
4、稀釋標本
      在使用半自動血液分析儀時，血液需要經過預稀釋以后方能檢驗，應特別注意稀釋溶血現象。稀釋溶血是指血液經高倍稀釋后，隨著放置時間的延長血細胞自行溶解的現象。所以血液稀釋后應盡快測定，以避少數量的減低。
5、溶血標本對分析結果的影響
      由于標本的處理不當，例如采血不順利、劇烈震蕩等，可以造成標本試管內溶血。溶血嚴重的標本可以使紅細胞和血球壓積下降、血紅蛋白相對增加，導致MCH和MCHC增高，而平均紅細胞體積正常。這一結果可以使臨床醫生作用錯誤的判斷，造成不良后果。所以對于溶血的標本，應重新采集標本后測定。
6、存放時間對結果的影響
      抗凝全血在室溫的條件下進行儀器測定，紅細胞、白細胞和血小板各項指標可以穩定24個小時，白細胞分類可穩定6-8小時，血紅蛋白可穩定數日。但如果在顯微鏡下進行白細胞分類，兩小時后粒細胞形態即有變化，所以如果需要做顯微鏡形態學檢查，應及早推制血片。雖然4攝氏度條件可延長血液儲存期，但血小板不宜在低溫下儲存，會影響計數和體積，因此如不能及時檢測血液應在室溫下保存。
      很多文獻報道EDTA鹽抗凝的靜脈血，在采血后的一小時內檢測MPV不穩定，血小板體積逐漸增高，可增大20%左右，一小時后趨向平穩，在1-6小時內變化小于3%。這是由于血液與EDTA鹽抗凝劑混合后，血小板形狀由凹形變為球形，體積增大的原因。所以為了結果的準確性，應該在一小時后進行測定。
      我們發現用EDTA抗凝的末梢血也應至少在15分鐘以后進行測定，因為在這段時間內有些標本血小板暫時的聚集現象，使血小板計數假性減少，這不僅影響血小板其它指標的準確性，也造成白細胞計數有所增高。取血后立刻檢測，標本的血小板和白細胞體積分布直方圖也是異常的，放置一段時間后再測定就可得到分布正常的直方圖。
7、溶血劑的用量及溶血時間
      全自動血液分析儀可以控制溶血劑的加入量及溶血劑作用時間。但在使用半自動血細胞計數儀進行血細胞計數時，需要在血液預稀釋后人工加入溶血劑，溶血以后再進行血細胞計數和分類計數，正確掌握溶血劑用量及溶血時間非常重要。如果加入量不足或加入后放置時間過短，可以造成溶血不完全，使未溶解的紅細胞計入白細胞中，造成白細胞假性增加。溶血不完全也可影響血紅蛋白的準確性。如果加入溶血劑量過多或放置時間太久白細胞明顯變形，使白細胞直方圖異常，白細胞分類計數結果不準確，甚至不能進行分類計數。
二、生理狀態及其它因素對實驗結果的影響
1、生理狀態
      除很多病理情況下可引起血細胞計數的變化外，很多生理狀態也可以引起各項參數的變化。如妊娠的婦女和新生兒白細胞總數明顯增多；炎熱和寒冷常引起一過性白細胞總數增多；大量吸煙的人因血液一氧化碳增高其血紅蛋白含量可以明顯增加；每天不同時間白細胞總數也有一定差異。
2、儀器的影響
      血液分析儀對環境要求較高，應遠離放射、核磁、放療加速器等大型醫療設備科室，以防止電信號的干擾。如果實驗室的電壓不穩，應安裝穩壓裝置，防止儀器產生大量的電噪音，干擾血小板計數結果。
      對一起的吸樣針、液體管道、計數池等應定期用酶清洗劑或5%次氯酸鈉進行徹底清洗，防止蛋白堆積。如果計數小孔周圍有蛋白堆積，可影響細胞體積測定，造成MCV增高。如果血紅蛋白比色池污濁可影響血紅蛋白定量結果。
3、試劑因素的影響
      目前國內還沒有一個廠家能生產具有白細胞分類功能的血液分析儀。國外廠商均要求使用與其配套的稀釋液和溶血劑，甚至對清洗劑也有一定的要求，增加試驗成本。但是如果隨意改用其它廠家的試劑或使用自己配制的試劑，雖然對紅細胞、白細胞和血小板的計數不會有明顯的影響，但是對白細胞分類計數和細胞體積的測定的影響會很大，有些還會影響血紅蛋白的測定，使得多項血細胞分析指標不準確，如MCV、HCT、HGB、MCH、MCHC、RDW、MPV、PVT、PDW血細胞分類及其異常警告的提示等。
      因為絕大多數血液分析儀采用電阻法進行細胞計數和體積測定，原理是基于細胞在測試系統中產生的脈沖大小與儀器設定的閥值比較而得出的數據，脈沖大小除與細胞體積有關外，還與溶血劑的種類、稀釋液的滲透壓、離子強度、電導率、儀器出廠時固定的孔電壓和脈沖的增益率等有關。所以為得到準確的結果，原則上應使用原儀器的配套試劑。如果采用自配試劑測試，通過驗證，其所得的數據結果必須與用原裝試劑結果一直，而且各種細胞體積分布圖形也必須完全一致。