影響ELISA試劑盒操作的因素

一、酶免ELISA試劑盒特異性要素

1、固相載體的挑選.ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板最為常見.它具有杰出的吸附功能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間功能附近.聚苯乙烯ELISA板因為質料的不一樣和制造技能的不同,各商品的質量區別很大.因而,在挑選試劑盒一起要對其運用的微孔板類型進行認證,評價。

2、包被物的純度.在酶聯免疫測定特別是直接ELISA中,試劑的特異性取決于運用抗原的純度.現在因為技能條件的約束,包被用抗原或抗體的純度不也許到達100%,所以有些非特異性顯色不行防止,只能盡也許進步純度,進步特異性.現在運用的包被抗原通常為合成多肽抗原。

3、包被抗體的效價.具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決議試劑特異性的主要方面。

4、關閉.是ELISA中主要的一步,意圖是關閉固相載體表面尚未被所占據的空地,削減后續步驟中非特異性蛋白的攪擾。

二、ELISA試劑盒檢驗標本中含有酶符號物的攪擾物

1、內源性攪擾物:類風濕因子（RF）、黃疸等,類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體,大都為IgM類,能充任抗原成分與固相及酶標抗體反響,然后呈現非特異性顯色。

2、外源性攪擾物,常常因樣品收集、儲存、處理不妥形成如樣品溶血,被細菌污染,標本凝聚不全等.溶血標本,紅細胞溶解決裂,釋放出血紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標本也許會增加非特異性顯色.如有細菌污染,菌體中也許含有內源性HRP（辣根過氧化酶）,有國內報導酶免HBsAg試劑檢查溶血標本時可形成假陽性。

三、ELISA試劑盒操作進程中的疑問形成假陽性 

1、加樣 ：對于直接ELISA標本通常都要進行稀釋,假如加樣禁絕就會形成誤差,特別當稀釋倍數大時,很小的誤差,會致使較大的相對誤差,使陰性（或弱陽性）標本呈陽性（或陰性）.加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行發生氣泡。

2、洗刷：在ELISA中準確的洗刷是確保得到可重復成果的關健一步,應引起操作者注重，無論是手工操作仍是機器操作,得出不準確的成果常與不準確的洗刷有關,ELISA即是靠洗刷來到達別離游離和的酶符號物的意圖.經過洗刷以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體的物質,以及在反響進程中非特異性吸附于固相載體的攪擾物質。

3 、溫育 ：每種試劑都有其反響形式,其中溫度和溫育時刻操控是主要要素.因孵育溫度高,反響時刻長,會形成整板本底高,陽性率高.溫育通常用濕盒或水浴,反響板不宜疊放,以確保各板溫度都能迅速平衡,為防止蒸騰,板上應加蓋。

4、酶標儀判讀 ：作為記錄測定成果的儀器,酶標儀的功能安穩與否,決議成果的牢靠度.首要酶標儀應定時進行養護,對濾光片要定時校對;其次酶標儀波長設置要準確,運用雙波長,一個檢查波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度區別形成的光攪擾.此外,在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部并壓平板條。

綜上所述,因為酶聯免疫吸附技能現在在技能上缺乏標準化,雖然現在國際上以及我國有了部分標準血清或參比血清（血清盤），但因為受方法學及技能條件的約束,在酶聯吸附測定中有時不行防止的會呈現必定的非特異性,但咱們能夠經過以上措施把非特異性顯色降至最低限底,然后進步檢查的特異性,并得到更準確、牢靠的試驗成果。