[摘要]目的尋找應用微柱凝膠法進行交叉配血出現假陽性結果的原因。方法用微柱凝膠法對本院需要輸血的患者進行交叉配血,陽性者再用凝聚胺法及抗球蛋白配血法交叉配血后進行比較。結果2537例配血中檢測出假陽性14例占0.55%。結論微柱凝膠法進行交叉配血靈敏度高,自動化程度高,但也容易引起假陽性,給交叉配血造成一定的困擾。
[關鍵詞]微柱凝膠;交叉配血;假陽性
微柱凝膠法是近幾年剛傳入我國的一種用于抗體篩查、交叉配血的方法,該方法標本用量少,靈敏度高,特異性強,操作簡單,結果可較長時間保存[1]。我院檢驗科用微柱凝膠法對2537例患者進行交叉配血,現將結果分析如下。
1材料和方法
111樣本來源所選病例為我院需要輸血的2537例患者,供血者為南京市血液中心提供的“小辮子”血。
112試劑微柱凝膠配血卡,專用離心機和孵育箱(瀚通公司);凝聚胺試劑(珠海貝索生物技術有限公司),抗球蛋白試劑(上海血液中心)。
113方法
11311微柱凝膠法標記好cellbind血型卡,主側:45μL受血者血清加2%供血者紅細胞懸液45μL;次側:45μL供血者血清加2%受血者紅細胞懸液45μL,37℃孵育15min后專用離心機離心10min,觀察結果,紅細胞沉積在凝膠管底部者為陰性,紅細胞聚集在凝膠帶上部為陽性。
11312凝聚胺介質法主管供者2%紅細胞懸液2滴加受者血清2滴,次管受者2%紅細胞懸液2滴加供者血清2滴,混勻后加低離子溶液0.7mL,混勻再加凝聚胺溶液2滴,3000r/min離心10s,倒掉上清液,輕搖有凝集,再加懸浮液2滴,凝集在1min內散開為陰性,凝集不散開為陽性。
11313抗球蛋白法主側管受者血清2滴+5%供者紅細胞懸液1滴;次側管5%受者紅細胞懸液1滴+供者血清2滴;陽性對照管5%Rh(D)陽性紅細胞懸液1滴+IgG抗-D血清2滴;陰性對照管5%O型試劑紅細胞懸液1滴+AB型血清2滴;鹽水對照1管5%供者紅細胞生理鹽水懸液1滴+生理鹽水2滴;鹽水對照2管5%受者紅細胞生理鹽水懸液1滴+生理鹽水2滴。置37℃水浴致敏1h后鹽水洗滌紅細胞3次,傾去上清液加最適稀釋度抗球蛋白血清1滴,混勻,1000r/min離心1min,主次管都不凝集表示輸血無禁忌。
2結果
用微柱凝膠法檢測出14例次側管有凝集,用抗球蛋白法和凝聚胺遞質法檢測均為陰性,后經輸注懸浮紅細胞后期觀察,無不良反應,確定為假陽性。14例假陽性中因為紅細胞懸液濃度過高而引起6例,由于纖維蛋白的影響引起3例,因疾病原因引起4例,因冷凝集素引起1例。
3討論
微柱凝膠法是建立在抗人球蛋白基礎上的一種新方法。
在微柱中進行,柱內預先裝有凝膠及抗人球蛋白,紅細胞與相應的抗體反應后離心,凝集的紅細胞被阻滯于柱上層,游離的紅細胞見于柱底,結果明確可靠,用肉眼即可判斷。微柱凝膠法靈敏度高,特異性強,配血便于自動化,標準化,無需顯微鏡觀察,重復性好,結果穩定,觀察直觀,易于長期保存。但是在實際操作中,微柱凝膠法也會因為一些因素而引起假陽性。
311標本因素①標本抗凝不充分,血漿中纖維蛋白的干擾或紅細胞呈小凝塊,在配血中雖沒有特異抗原抗體反應,但在離心時,卻可以阻止紅細胞透過凝膠層而沉淀出現(+)～(6)假陽性,對這種現象采用EDTA真空采血管時要及時充分混勻。②標本離心不充分時,大量的白細胞或血小板聚集形成凝塊黏附在凝膠上呈(+)～(6)假陽性,因此離心時2000r/min應離心5min。③紅細胞懸液的濃度不適或血漿與血細胞的比例不適引起假陽性。紅細胞懸液以生理鹽水洗滌后配成2%的濃度最佳[2],吸取紅細胞時,應在整個壓積紅細胞的中間部位吸取,以免吸入上層白細胞、血小板和下層的凝塊。
312溫度因素微柱凝膠法中,雖然在溫箱內孵育15min,可有效消除冷凝集素的影響,但在某些病理情況下(如白血病、支原體肺炎和惡性淋巴瘤等),冷凝集效價明顯升高,造成配血中紅細胞假凝集。通常冷凝集效價1∶64時即可引起紅細胞假凝集[3],因此,配血時孵育時間要充分,并要控制室溫。