微核檢測實驗

靜脈血血清

肝素培養液EaglePHA甲醇冰醋酸Giemsa甲基纖維素明膠

方瓶離心機沉淀管

1.  方法一

（1）采血

靜脈采血0.5 ml，肝素抗凝，用小方瓶培養，加培養液5 ml；

培養液組成為：含20 %小牛血清的Eagle液，加PHA 40 μg/ml；

（2）培養

置37 ℃溫箱培養48 或72 小時，以1000 rpm離心8 分鐘；

（3）固定

3 L 1甲醇/冰醋酸固定3 次，每次15 分鐘，離心沉淀固定液；

（4）制片

冷凍載片滴片法制片、自然干燥；10 %Giemsa（pH6.8）染色15 分鐘。

2.  方法二
 

（1）采血

肝素抗凝血0.5～0.6 ml，置10 ml試管中，加入血量一半的0.5 %甲基纖維素，充分混合；

（2）培養

置37 ℃溫箱靜置培養30 分鐘，以2000 rpm離心10 分鐘，去上清液；

（3）制片

做涂片，Wright法染色。

3.  方法三

（1）采血

用三棱針刺無名指取血0.6 ml，立即注入內徑3 mm、長5 cm的血液沉淀管中，用小玻棒攪拌除去纖維蛋白；

（2）加明膠

加入3 %的明膠（其量為血量的1/3或1/2），小心混勻，置37 ℃溫箱自然沉降50 分鐘；

（3）吸去上清液、離心、沉淀物涂片、自然干燥、Wright染色30 分鐘、再用Giemsa染色2 分鐘。

1.  微核法簡便易行，但僅適用于檢測那些在細胞分裂時對紡錘體和染色體有影響的有關因素。

2.  對毒性小的物質可能不很敏感；微核檢出率約有30 %的誤差。

一、凡具分裂能力易于獲得的培養細胞以及很多其它細胞都可用于顯示微核

1.  人末梢血淋巴細胞培養

對檢測環境中致突和致癌物非常簡便和有效，對預報危害人體有害因素有重要意義。

2.  二倍體細胞

組織培養人工倍體成纖維細胞及其它細胞。

3.  動物骨髓細胞

哺乳動物骨髓多染性紅細胞：可直接在體內給藥后做細胞涂片顯示微核，是目前最標準的微核指示細胞。

4.  動物肝細胞

哺乳動物肝細胞能代謝和活化多種藥物，可用于檢測間接致癌物。

5.  人口腔上皮細胞

人口腔粘膜脫落細胞：做口腔涂片后，直接染色顯示微核，簡便易行。

6.  植物細胞

洋蔥根尖細胞、鴨跖草等用于檢測環境致突變物、致癌物，簡便有效。

二、檢測微核的標準

1.  存在時相

微核必須在胞漿完整的間期細胞中，形態為圓形或橢圓形。

2.  體積

直徑小于主核的1/5。

3.  與主核關系

與主核完全脫離。

4.  染色

染色與主核一致。

5.  計數

在高倍鏡下，每例計數2000 個細胞，結果以含微核細胞的千分率表示。