微生物培養基配制與滅菌方法及步驟

 微生物培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。由于微生物具有不同的營養類型，對營養物質的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培養基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養角度分析，微生物培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。為了達到特定要求的研究，需要進行培養基配制和滅菌，那么微生物培養基該如何配制與滅菌呢?

1.配制溶液

向容器內加入所需水量的一部分,按照培養基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,最后補足所需水分，對蛋白胨、肉膏等物質,需加熱溶解,加熱過程所蒸發的水分,應在全部原料溶解后加水補足。

配制固體培養基時,先將上述已配好的液體培養基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續加熱至完全融化.并不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。

2.調節pH值

用pH試紙(或pH電位計、氫離子濃度比色計)測試培養基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進行調節,直到調節到配方要求的pH值為止。

3.過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾.用紗布過濾時,最好折疊成六層,用濾紙過濾時,可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏斗上過濾。

4.分裝

已過濾的培養基應進行分裝.如果要制作斜面培養基,須將培養基分裝于試管中.如果要制作平板培養基或液體、半固體培養基,則須將培養基分裝于錐形瓶內。分裝時,一手捏松彈簧夾,使培養基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養基。分裝時,注意不要使培養基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。裝入試管的培養基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培養基時,每只15×150毫米的試管,約裝3～4毫升(1/4～1/3試管高度),如制作深層培養基,每只20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每只錐形瓶裝入的培養基,一般以其容積的一半為宜。

5.加棉塞

分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染.棉塞應采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。制作棉塞時,要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時左手食指與姆指稍稍緊握,就會形成1個長棒形的棉塞.棉塞作成后,應迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應緊貼內壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內,上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札,準備滅菌。

6.制作斜面培養基和平板培養基

培養基滅菌后,如制作斜面培養基和平板培養基,須趁培養基未凝固時進行。

(1)制作斜面培養基。在實驗臺上放1支長0.5～1米左右的木條,厚度為1厘米左右，將試管頭部枕在木條上,使管內培養基自然傾斜,凝固后即成斜面培養基。

(2)制作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗臺上,點燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養皿蓋,右手迅速將培養基倒入培養皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度.鋪放培養基后放置15分鐘左右,待培養基凝固后,再5個培養皿一疊,倒置過來,平放在恒溫箱里,24小時后檢查,如培養基末長雜菌，即可用來培養微生物。