微生物大小的測定

實驗方法原理

鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片。一般將1 mm 等分為100格（或2 mm等分為200格），每格長度等于0.01 mm（即106 μm）。是專用于校正目鏡測微尺每格長度的。目鏡測微尺是一塊可放在接目鏡內的隔板上的圓形小玻片，其中央刻有精確的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長線相隔。由于所用接目鏡放大倍數和接物鏡放大倍數的不同，目鏡測微尺每小格所代表的實際長度也就不同，因此，目鏡測微尺不能直接用來測量微生物的大小，在使用前必須用鏡臺測微尺進行校正，以求得在一定放大倍數的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值，然后才可用來測量微生物的大小。

實驗材料 枯草芽孢桿菌染色玻片標本

試劑、試劑盒 香柏油

儀器、耗材 目鏡測微尺鏡臺測微尺顯微鏡擦鏡紙

實驗步驟

1.  目鏡測微尺的標定

（1）放置目鏡測微尺取出接目鏡，旋開接目鏡透鏡，將目鏡測微尺的刻度朝下放在接目鏡筒內的隔板上，然后旋上接目透鏡，最后將此接目鏡插入鏡筒內。

（2）放置鏡臺測微尺將鏡臺測微尺置于顯微鏡的載物臺上，使刻度面朝上。

（3）校正目鏡測微尺先用低倍鏡觀察，對準焦距，當看清鏡臺測微尺后，轉動接目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行，移動推動器，使目鏡測微尺和鏡臺測微尺的某一區間的兩對刻度線完全重合，然后計數出兩對重合線之間各自所占的格數。

根據計數得到的目鏡測微尺和鏡臺測微尺重合線之間各自所占的格數，通過如下公式換算出目鏡測微尺每小格所代表的實際長度。

同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。

2.  菌體大小的測定

目鏡測微尺校正后，移去鏡臺測微尺，換上枯草芽孢桿菌染色玻片標本，校正焦距使菌體清晰，轉動目鏡測微尺（或轉動染色標本），測出枯草芽孢桿菌的長和寬各占幾小格，將測得的格數乘以目鏡測微尺每小格所代表的長度，即可換算出此單個菌體的大小值，在同一涂片上需測定10至20個菌體，求出其平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數生長期的菌體來進行測定。

3.  取出目鏡測微尺，將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測微尺和鏡臺測微尺分別用擦鏡紙擦拭后，放回盒內保存。

4.  結果

（1）將目鏡測微尺校正結果填入下表。

（2）在高倍鏡下測量枯草芽孢桿菌大小結果填入下表。