Crystal Anaerobe 厭氧菌 4h
Crystal E/NF 腸桿菌科、某些革蘭陰性非發酵菌 18~24h
Crystal Gram Positive 革蘭陽性球菌和桿菌 18~24h
Crystal MRSA ID MRSA 4h
Crystal Neisserial/Haemophilus 奈瑟菌屬、嗜血桿菌屬、莫拉菌屬、加德納菌屬、其它的苛養菌 4h
Crystal Rapid Gram Positive 革蘭陽性球菌和桿菌 4h
Crystal Rapid stool/Enteric 革蘭陰性腸道致病菌 3h
Enterotube Ⅱ 腸桿菌科 18~24h
ID Tri-Panel 革蘭陰性和陽性菌 16~20h;40~44h
MiniTek 厭氧菌、腸桿菌科、革蘭陽性菌、奈瑟菌屬、非發酵菌、酵母菌 4h(腸桿菌科、奈瑟菌屬)
72h(酵母菌)
Oxi/FermⅡ 革蘭陰性、氧化酶陽性葡萄糖發酵或不發酵菌
24~48h
NEG ID Type2 腸桿菌科、其它的發酵和非發酵菌 15~42h
Pos ID 革蘭陽性球菌和李斯特菌屬 18~48h
Rapid Anaerobe 厭氧菌 4h;需氧
Rapid HNID 奈瑟菌屬、嗜血桿菌屬、卡他莫拉菌、陰道加德納菌 4h
Rapid NEG ID Type2 腸桿菌科、其他的發酵和非發酵菌 2h
Rapid NEG ID Type3 腸桿菌科、其他的發酵和非發酵菌 2.5h
Rapid Pos ID 革蘭陽性球菌和李斯特菌屬 2h
Rapid Yeast ID 酵母菌 4h
Micro-ID 腸桿菌科 4h
RapID ANAⅡ 厭氧菌 4~6h;需氧
RapID CB Plus 棒狀桿菌 4h
RapID NF Plus 非發酵革蘭陰性桿菌 4h
RapID NH 奈瑟菌、嗜血桿菌和其它革蘭陰性細菌 4h;1h(淋球菌)
RapID onE 腸桿菌科和其它氧化酶陰性菌 4h
RapID STR 鏈球菌 4h
RapID Yeast Plus 酵母菌和酵母菌樣菌 4h
AN 厭氧菌 4~16h;需氧
GN Microplate 需氧革蘭陰性桿菌 4~24h
GP Microplate 大多數革蘭陽性球菌和桿菌 4~24h
YT 酵母菌 24~72h
Neisseria Enzyme test 奈瑟菌屬、莫拉菌屬 30min
r/b Enteric Differential System 腸桿菌科 18~24h
Uni-Yeast Tek 酵母菌 24h~6d
Uni-N/F-Tek 革蘭陰性發酵或不發酵細菌 24~28h
Medical Specialties Inc. Fox Exera GNI 腸道和非腸道革蘭陰性桿菌 18~24h
AccuMed International, Inc. Sensititre AP 80 腸桿菌科和非發酵革蘭陰性桿菌 5~18h
二、自動化的微生物鑒定和藥敏試驗分析系統
自動化的微生物鑒定和藥敏試驗分析系統在臨床微生物實驗室的應用,為微生物檢驗工作者對病原菌的快速診斷和藥敏試驗提供了有力工具。鑒定系統的工作原理因不同的儀器和系統而異。不同的細菌對底物的反應不同是生化反應鑒定細菌的基礎,而試驗結果的準確度取決于鑒定系統配套培養基的制備方法、培養物濃度、孵育條件和結果判定等。大多鑒定系統采用細菌分解底物后反應液中pH的變化,色原性或熒光原性底物的酶解,測定揮發或不揮發酸,或識別是否生長等方法來分析鑒定細菌。各種微生物鑒定系統的反應基礎見表6-4-4。
藥敏試驗分析系統的基本原理是將抗生素微量稀釋在條孔或條板中,加入菌懸液孵育后放入儀器或在儀器中直接孵育,通過測定細菌生長的濁度,或測定培養基中熒光指示劑的強度或熒光原性物質的水解,觀察細菌的生長情況。在含有抗生素的培養基中,濁度的增加提示細菌生長,根據判斷標準解釋敏感或耐藥。
表 6-4-4 各種微生物鑒定系統的反應基礎
系統源性 需要培養 分析 陽性結果指示 系統舉例
酶譜分析
(通常2~4h) 不需要 酶活性 色原性/熒光性底物混合物被酶水解后產生顏色變化 MicroScan Rapid panels、IDS
pH為基礎的反應
(通常15~24h) 需要 碳水化合物利用 pH指示顏色變化 碳水化合物分解產酸,蛋白質或含氮化合物被水解產堿 API、Crystal、VITEK cards、 Micro Scan conventional panels
碳源利用 需要 有機物 無色變為紫色 Biolog
揮發性和不揮發酸測定 需要 細胞脂肪酸 氣相色譜鑒定終末產物與已知圖譜比較 MIDI
肉眼觀察生長 需要 各種底物 混濁生長 酵母菌鑒定
半自動化細菌鑒定和/或藥敏分析系統
1.VITEK-ATB半自動細菌鑒定和藥敏分析系統
VITEK-ATB是生物-梅里埃公司產品,由計算機和讀數器兩部分組成,計算機程序包括ATB和API的鑒定數據庫、ATB的藥敏數據庫、數據儲存和分析系統及藥敏專家系統。鑒定和藥敏反應板在機外孵育后,一次性上機讀取結果,由計算機進行分析和處理,并報告細菌鑒定和藥敏結果。
2.AutoScan-4半自動細菌鑒定和藥敏分析系統
AutoScan-4是由Dade MicroScan公司生產,由計算機和讀數器兩部分組成。鑒定和藥敏反應板在機外孵育后,一次性上機,自動判讀鑒定和藥敏試驗結果;亦可人工進行判讀,將編碼輸入計算機,由計算機軟件評定結果。有鑒定及鑒定藥敏復合板兩種測試卡。
3.BBLTM CrystalTM半自動細菌鑒定系統
BBLTM
CrystalTM半自動細菌鑒定系統是BD公司產品,將傳統的酶、底物生化呈色反應與先進的熒光增強顯色技術結合以設計鑒定反應最佳組合。反應板在機外孵育后,上機自動判讀鑒定結果。配套提供獨立分裝的鑒定用肉湯試管,確保無菌狀態,使用方便。配套比濁儀可快速調配所需濁度的菌液
4.AutoReader半自動細菌鑒定和藥敏分析系統
AutoReader半自動細菌鑒定和藥敏分析系統是Trek
Diagnostic Systems
LTD.產品,由計算機和讀數儀等組成。采用熒光測定法,反應板在機外作定時孵育后,上機讀數,由SAMS軟件評定測定結果,也可通過SAMS系統人工確認法輸入計算,或完全由人工輸入作評定。所用鑒定板和藥敏板與全自動機型中的反應板是一樣的。
5.抑菌圈直徑測量儀
抑菌圈直徑測量儀有BIOMIC(Giles
Scientific Inc),AccuZone System (AccuMed International Inc) ,SIRSCAN
(SIRSCAN)
等三種單板讀取機,已在臨床應用。經孵育后的藥敏平板,被儀器的圖象分析系統識別并計算抑菌圈直徑。根據判斷標準,報告藥敏試驗結果。這些儀器可減少人工測量抑菌圈直徑大小差異及主觀判斷錯誤。BIOMIC系統宣稱能根據抑菌圈大小來計算MIC,值得注意的是該類儀器對抑菌圈內模糊生長或微小的菌落不能正確識別,而這些菌落對細菌的耐藥性的判定至關重要,讀取每個平板時必須進行人工觀察。
(二)全自動的微生物鑒定和藥敏試驗分析系統
1.VITEK 系統
VITEK
AMS是由生物-梅里埃公司生產的全自動微生物鑒定和藥敏分析系統。第一代產品有以下四個規格VITEK AMS
32、60、120、240。由計算機主機、孵育箱/讀取器、充填機/封口機、打印機等組成。鑒定原理是根據不同微生物的理化性質不同,采用光電比色法,測定微生物分解底物導致pH改變而產生的不同顏色,來判斷反應的結果。在每張卡上有30項生化反應。由計算機控制的讀數器,每隔1h對各反應孔底物進行光掃描,并讀數一次,動態觀察反應變化。一旦鑒定卡內的終點指示孔到臨界值,則指示此卡已完成。系統最后一次讀數后,將所得的生物數碼與菌種數據庫標準菌的生物模型相比較,得到相似系統鑒定值,并自動打印出實驗報告。
獲得細菌的純培養后,調整菌懸液濃度,根據不同的細菌選擇相應的藥敏試驗卡片,在充液倉中對卡片進行充液。置孵育箱/讀數器中孵育,自動定時測試、讀取數據和判斷結果。VITEK可快速鑒定包括各種腸桿菌科細菌、非發酵細菌、苛氧菌、革蘭陽性球菌、革蘭陰性球菌、厭氧菌和酵母菌等500種臨床病原菌。具有20多種藥敏測試卡、97種抗生素和測定超廣譜β-內酰胺酶測試卡,快速檢測細菌藥敏情況。
該系統有根據細菌耐藥規律而設定的專家系統,可幫助校正和修改結果。對于專家系統提示的不可能的或極少見的耐藥表型應予以充分重視,需采用確認試驗重新鑒定。如對萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌,對泰能耐藥的腸桿菌,對青霉素耐藥的β溶血性鏈球菌等。
VITEK-2是生物-梅里埃公司開發的新一代微生物分析儀,其工作原理與VITEK AMS沒有大的差別,但它的容量更大,自動化程度更高,并且使用64孔的反應卡片,鑒定更準確可靠,可同時測定20種抗生素的藥敏試驗。
2. MicroScan Walk/ Away系統
MicroScan
Walk/
Away系統由主機、真空加樣器、孵育箱/讀取器、計算機、打印機等組成。除采用傳統呈色反應法外,同時采用敏感度極高的快速熒光測定技術來檢測細菌胞外酶,鑒定板有普通板和快速板兩種,普通板獲得結果需要16~18h,快速板測定只需2~3.5h。該系統有8種鑒定反應板,可鑒定包括革蘭陰性菌、革蘭陽性菌、厭氧菌、酵母菌、嗜血桿菌和奈瑟菌等近800種細菌。藥敏部分采用比濁法進行測定,90%菌株可在5.5h內獲得對17~33種抗菌藥物的MIC值。此系統有walk
/ Away-40和96兩個型號,40或96分別代表該系統可同時容納40或96個測試板。
3.PHOENIXTM 系統
PHOENIXTM
System是新一代全自動快速細菌鑒定/藥敏系統,由BD公司生產。鑒定試驗采用BDZL熒光增強技術與傳統酶、底物生化呈色反應相結合的原理。藥敏試驗采用傳統比濁法和BDZL呈色(Chromogenic)反應雙重標準進行藥敏試驗結果判斷。儀器由主機、比濁儀、微生物專家系統等組成。有PHOENIXTM
100或50 二種型號。PHOENIXTM
100型分別可進行100個鑒定試驗和100個藥敏試驗。可鑒定革蘭氏陽性菌139種、革蘭氏陰性菌158種。有鑒定板、藥敏板或鑒定/藥敏復合板3種可供選擇。每個鑒定藥敏復合板有51孔用于鑒定試驗,85孔用于藥敏試驗,可同時進行17種抗菌素5種濃度或28種抗菌素3種濃度的MIC藥敏試驗。90%細菌的鑒定在3~6h完成,鑒定準確率大于90%,85%的細菌藥敏試驗在4~6h內出結果。
4.SENSITITRE ARIS系統
該系統由計算機主機、孵育箱/讀數儀、全自動加樣器等組成。在培養箱中設置可存放64塊板的轉盤,每塊板均能檢測3個標本,故同時可檢測192個菌種標本。在測定板底物中加入酶基質,使其與細菌產生的酶結合成熒光物質。在較短時間內能夠分析不同生化底物所反映出的熒光物質,通過熒光讀數儀檢測板孔中熒光Biocide和Willcox值來鑒定細菌。該系統的藥敏試驗有兩種測定法,即當采用人工判定時為比濁法,當采用儀器自動判讀時為熒光測定法。但均參照NCCLS的標準和規則來解釋結果。大多數菌種均可在5小時內報告檢驗結果。通常有革蘭陰性菌、革蘭陽性菌、厭氧菌、苛氧菌及真菌鑒定板和300多種抗菌藥物不同組合的藥敏板及鑒定/藥敏復合板。
(三)使用自動化鑒定儀的局限性
1.自動化鑒定系統是根據數據庫中所提供的背景資料鑒定細菌,數據庫資料的不完整將直接影響鑒定的準確性。目前為止,尚無一個鑒定系統能包括所有的細菌鑒定資料。對細菌的分類是根據傳統的分類方法,因此鑒定也以傳統的手工鑒定方法為“金標準”。使用自動化鑒定儀的實驗室,應對技術人員進行手工鑒定基礎與操作技能培訓。
2.細菌的分類系統隨著人們對細菌本質認識的加深而不斷演變,使用自動化鑒定儀的實驗室應經常與生產廠家聯系,及時更新數據庫。實驗室技術人員應了解細菌分類的最新變化,便于在系統更新之前即可進行手工修改。
3.通過自動化鑒定儀得出的結果,必須與其它已獲得的生物性狀(如標本來源、菌落特征及其它的生理生化特征)進行核對,以避免錯誤的鑒定。