1. 鞭毛染色 （1）菌種用新培養的菌種為宜，如所用菌種已長期未移種，則用新制備的斜面連續移種2~3次后再使用。最好是將經活化的菌種接種到新制備的瓊脂斜面或半固體培養基平皿上，培養10小時左右，備用。 （2）制片在載玻片的一端滴一滴蒸餾水，用接種環挑取少許備用的菌苔，最好從菌落的邊緣取菌苔，注意不要挑上培養基，在載玻片的水滴中輕沾幾下。將載玻片稍傾斜，使菌液隨水滴緩慢流到另一端，然后平放在空氣中干燥。 （3）染色涂片干燥后滴加A液染3~5分鐘，用蒸餾水沖洗，或將殘水瀝干或用B液沖去殘水（注意：一定要充分洗凈A液后再加B液，否則背景很臟）。洗凈A液滴加B液后，將玻片在酒精燈上稍加熱，使其微冒蒸汽且不干，一般染30~60秒鐘。然后用蒸餾水沖洗，自然干燥。 （4）鏡檢鏡檢時，如未見鞭毛，應在整個涂片上多找幾個視野，有時只在部分涂片上染出鞭毛。菌體為深褐色，鞭毛為褐色。 細菌鞭毛染色要求非常小心細致，染色成功的關鍵主要決定于：
①菌種活化的情況，即要連續移種幾次。
②菌齡要合適，一般在幼齡時鞭毛情況最好，易于染色。
③新鮮的染色液。
④載玻片要求干凈無油污。
鞭毛染色所用載玻片的清洗方法如下： 選擇光滑無傷痕的玻片。先用洗衣粉煮沸，洗衣粉最好在洗玻片前加蒸餾水煮沸，用濾紙過濾去渣。為了避免玻片彼此磨損，最好把載玻片放在特制的架上煮，煮畢稍冷卻后取出，用清水洗凈，再放入濃洗液中浸泡24小時左右，取出用清水沖洗殘酸，最后用蒸餾水洗凈，瀝干水并放于95%乙醇中脫水，取出玻片，用火焰燒去酒精，立即使用。如不立刻使用，可存放于干凈的盒中或50%乙醇中短期存放。由于空氣中常常漂浮油污，最好立即使用。在洗凈的玻片上滴上水滴后應能均勻散開。 2. 運動性觀察 （1）壓滴法 ①分別將5 ml 無菌水倒入蘇云金芽孢桿菌、假單胞菌和金黃色葡萄球菌的斜面培養物內，制成菌懸液。各取出1 ml 菌液稀釋至肉眼看不到混濁為止。 ②各取2~3環三種稀釋菌液，分別放在三片清潔的載玻片中央，再各放一環萬分之一的美藍水溶液混勻。 ③用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，使其一邊先接觸菌液，然后將整個蓋玻片慢慢放下，注意不要產生氣泡。按此法分別將蓋玻片覆蓋于三種菌液上。 ④先以低倍鏡找到標本，再用高倍鏡觀察，觀察時光線要調得暗些。 （2）懸滴法 ①在潔凈蓋玻片周圍涂少許凡士林。 ②在蓋玻片中央滴一小滴菌液，或用接種環取1-2環菌液置于中央。 ③將凹玻片反轉，使凹窩中心對準蓋玻片上的菌液滴，液滴不得與凹玻片接觸，以接種環柄輕壓使蓋玻片與凹玻片粘在一起，液滴處于封閉的小室中，防止液滴干燥和氣流的影響。 ④小心將凹玻片翻轉過來，使菌滴仍懸浮在蓋玻片下和凹窩中心。 ⑤先用低倍鏡找到懸滴邊緣，再用高倍鏡觀察。觀察時光線要調得暗一些。 用懸滴法分別觀察蘇云金芽孢桿菌、假單胞菌和金黃色葡萄球菌的運動性。細菌的運動有一定的前進方向，并可轉彎，極生單鞭毛菌類多為直線運動，周生鞭毛菌類多作波浪式運動。 展 | 