微生物染色液配制及染色法

 1、美藍染色法

1.1 呂氏堿性美藍染色液美藍 0.3g 95%乙醇 30mL 0.01%氫氧化鉀溶液100mL將美藍溶解于乙醇中,然后與氫氧化鉀溶液混合.

1.2 染色法將涂片在火焰上固定,待冷.滴加染液,染1～3min,水洗,待干,鏡檢.

1.3 結果菌體呈藍色.

2、革蘭氏染色法

2.1 結晶紫染色液結晶紫 1g 95%乙醇 20mL1%草酸銨水溶液 80mL將結晶紫溶解于乙醇中,然后與草酸銨溶液混合.

2.2 革蘭氏碘液碘 1g碘化鉀 2g蒸餾水 300mL將碘與碘化鉀先進行混合,加入蒸餾水少許,充分振搖,待完全溶解后,再加蒸餾水至300mL.

2.3 沙黃復染液沙黃 0.25g 95%乙醇 10mL蒸餾水 90mL將沙黃溶解于乙醇中,然后用蒸餾水稀釋.

2.4 染色法

  2.4.1 將涂片在火焰上固定,滴加結晶紫染色液,染1min,水洗.

  2.4.2 滴加革蘭氏碘液,作用1min,水洗.

  2.4.3 滴加95%乙醇脫色,約30s；或將乙醇滴滿整個涂片,立即傾去,再用乙醇滴滿整個涂片,脫色10s.

  2.4.4 水洗,滴加復染液,復染1min.水洗,待干,鏡檢.

2.5 結果革蘭氏陽性菌呈紫色.革蘭氏陰性菌呈紅色.注：亦可用1:10稀釋石炭酸復紅染色液作復染液,復染時間僅需10s. 

3、耐酸性染色法(萎－倪二氏法)

3.1 石炭酸品紅染色液堿性品紅 0.3g 95%乙醇 10mL 5%酚水溶液 90mL將品紅溶解于乙醇中,然后與酚溶液混合.

3.2 3%鹽酸－乙醇濃鹽酸 3mL 95%乙醇 97mL

3.3 復染液呂氏堿性美藍染色液.

3.4 染色法

  3.4.1 將涂片在火焰上加熱固定,滴加石炭酸品紅染色液,徐徐加熱至有蒸氣出現,但切 不可使沸騰.染液如因蒸發減少時,應隨時添加.染5min,傾去染液,水洗. 

  3.4.2 滴加鹽酸－乙醇脫色,直至無紅色脫落為止(所需時間視涂片厚薄而定,一般為1～3min),水洗.

  3.4.3 滴加呂氏堿性美藍染色液,復染30s～1min,水洗,待干,鏡檢.

3.5 結果：耐酸性細菌呈紅色,其他細菌、細胞等物質呈藍色.

4、柯氏染色法

4.1 染色液

  4.1.1 0.5%沙黃液.

  4.1.2 0.5%孔雀綠液.

4.2 染色法

  4.2.1 將涂片在火焰上固定,滴加0.5%沙黃液,并加熱至出現氣泡,約2～3min,水洗.

  4.2.2 滴加0.5%孔雀綠液,復染40～50s.水洗,待干,鏡檢.

4.3 結果布氏桿菌呈紅色,其他細菌及細胞呈綠色.

5、奧爾特氏莢膜染色法

5.1 染色液沙黃 3g蒸餾水 100mL用乳缽研磨溶解.

5.2 染色法將涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加熱至產生蒸氣后,繼續染3min.水洗,待干,鏡檢.

5.3 結果炭疽芽胞桿菌菌體呈赤褐色,莢膜呈黃色.

6、瑞氏染色法

6.1 染色液瑞氏色素 0.1g甲醇 60mL用乳缽研磨溶解.

6.2 染色法

  6.2.1 涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min.

  6.2.2 加入等量蒸餾水(pH6.5),染色3～5min.

  6.2.3 用蒸餾水沖洗,待干,鏡檢. 

7、鞭毛染色法

7.1 染色液的配制

  7.1.1 甲液：稱丹寧酸5g、氯化高鐵(FeCl3)1.5g,溶于100mL蒸餾水中,待溶解后加入1%的氫氧化鈉溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL.

  7.1.2 乙液：稱2g硝酸銀溶于100mL蒸餾水中.在90mL乙液中滴加濃氫氧化銨溶液,到出現沉淀后,再滴加使其變為澄清,然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出現輕微霧狀為止(此為關鍵性操作,應特別小心).滴加氫氧化銨和用剩余乙液回滴時,要邊滴邊充分搖蕩,染液當天配,當天使用,2～3d基本無效.

7.2 染色法在風干的載玻片上滴加甲液,4～6min后,用蒸餾水輕輕沖凈.再加乙液,緩緩加熱至冒汽,維持約半分鐘(加熱時注意勿使出現干燥面).在菌體多的部位可呈深褐色到黑色,停止加熱,用水沖凈,干后鏡檢,菌體及鞭毛為深褐色到黑色.

8、堿性復紅染色法

    將0.5g堿性復紅染料溶解于20mL95%乙醇中,然后用蒸餾水稀釋至100mL.如有不溶物時,可用濾紙過濾,或靜置后取上清液備用.注：本染色液系用于蘇云金芽胞內蛋白質毒素結晶的染色,藉以與蠟樣芽胞桿菌相區別.