微生物營養及環境條件實驗（二）

3、溫度對微生物生長的影響

⑴接種：取牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養基8支，用接種環按無菌操作法分別在斜面上劃線接種大腸桿菌與枯草桿菌，勿劃破培養基。

⑵培養：將已接種的斜面培養基，分別放在4℃、28℃、37℃和45℃四種溫度下培養。

⑶觀察：培養48h、72h后觀察生長狀況，根據菌苔的大小確定其生長*適溫度。

4、氫離子濃度對微生物生長的影響

⑴培養基制備：分組按下列配方配制不同pH值的培養基，并用pH計校證pH值，然后分裝入試管中，每管裝量5～6 mL,0.1Mpa滅菌30min備用，見表。

⑵接種培養：取供試pH培養基三組用接種環按無菌操作法于試管中分別接入大腸桿菌、吸水鏈霉菌、黑曲霉。在37℃下培養48h。

⑶檢查結果：出取培養物，觀察并記錄實驗結果。

5、紫外線殺菌試驗

⑴制平板：取無菌平皿6套，將已熔化并冷卻至50℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基

不同pH值培養基配制表

按無菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。

⑵菌懸液制備：取試管無菌水2支，以無菌操作法分別取金黃色葡萄球菌和黏質沙雷氏菌各2環，接入無菌水中充分搖勻，制成菌懸液。

⑶接種：將已倒入培養基的平皿分成2組，每組3個，一組接金黃色葡萄球菌，一組接沙雷氏菌，用無菌吸管吸取已制好的菌懸液各0.1 mL，分別在接種于二組平板上，用無菌玻璃刮鏟布均涂勻，隨即用無菌鑷子夾取無菌圖案紙一張，小心放在接種好的平皿中央。

⑷分組：將接種的六個平皿分為三組，每組一個金黃色葡萄球菌，一個黏質沙雷氏菌。

⑸紫外線處理：將紫外燈先開燈預熱2～3min。再將上述平皿置于紫外燈下，打開皿蓋，在30cm距離處照射。一組照1min，1組照5min，1組照10min，小心地取下圖案紙，蓋上皿蓋。用黑布或厚紙遮蓋，送入培養室內。★此時能否不進行遮蓋處理，直接拿出來培養？

⑹培養：將平皿于28～30℃溫度下培養48h。

⑺觀察：兩菌在不同的處理條件下的生長狀況，即有無生長、生長數量多少、生長的位置等。

6、化學藥劑對微生物的作用

⑴制平板：取無菌平皿3套，將已熔化并冷卻至50℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基按無菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。

⑵制備菌懸液：取無菌水3支，用接種環分別取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌各1～2環接入無菌水中，充分混勻，制成菌懸液。

⑶接種：用無菌吸管分別吸取已制好的菌懸液0.1mL接種于平板上，用無菌玻璃刮鏟涂勻。注意做好標記。

⑷浸藥：將滅菌濾紙片浸入供試藥劑中。

⑸加藥劑：用無菌鑷子夾取浸藥濾紙片，注意把藥液瀝干，分別平鋪于同一含菌平

板上，注意藥劑之間勿互相沾染并在平皿背面做好標記。

⑹培養：將平皿置于28℃下培養48～72h后觀察結果。