微生物限度檢查法—需用特殊供試液制備方法的供試品的簡介

　　(1)微生物限度檢查法— 非水溶性供試品

　　方法1 取供試品5g（或5ml），加至含溶化的（溫度不超過45℃）5g 司盤80、3g 單硬脂酸甘油酯、10g 聚山梨酯80 無菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團后，慢慢加入45℃的pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1∶20 的供試液。

　　方法2 取供試品10g，加至含20ml 無菌十四烷酸異丙酯和無菌玻璃珠的適宜容器中，必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入45℃的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，振搖5～10 分鐘，萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為1∶10 的供試液。

　　(2)微生物限度檢查法— 膜劑供試品

　　取供試品100c㎡，剪碎，加100ml 的pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（必要時可增加稀釋液），浸泡，振搖，作為1∶10 的供試液。

　　(3)微生物限度檢查法— 腸溶及結腸溶制劑供試品

　　取供試品10g，加pH6.8 無菌磷酸鹽緩沖液（用于腸溶制劑）或pH7.6 無菌磷酸鹽緩沖液（用于結腸溶制劑）至100ml，置45℃水浴中，振搖，使溶解，作為1∶10 的供試液。

　　(4)微生物限度檢查法— 氣霧劑、噴霧劑供試品

　　取規定量供試品，置冰凍室冷凍約1 小時，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器吸出全部藥液，加至適量的pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適量的無菌聚山梨酯80）中，混勻，取相當于10g或10ml 的供試品，再稀釋成1∶10 的供試液。

　　(5)微生物限度檢查法— 貼膏劑供試品

　　取規定量供試品，去掉貼膏劑的保護層，放置在無菌玻璃或塑料片上，粘貼面朝上。用適宜的無菌多孔材料（如無菌紗布）覆蓋貼劑的粘貼面以避免貼劑粘貼在一起。然后將其置于適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀釋劑中，用力振蕩至少30 分鐘，制成供試液。貼膏劑也可以其他適宜的方法制備成供試液。

　　(6)微生物限度檢查法— 具抑菌活性的供試品

　　當供試品有抑菌活性時，采用下列方法進行處理，以消除供試液的抑菌活性后，再依法檢查。常用的方法如下。

　　①培養基稀釋法 取規定量的供試液，至較大量的培養基中，使單位體積內的供試品含量減少，至不含抑菌作用。測定細菌、霉菌及酵母菌的菌數時，取同稀釋級的供試液2ml，每1ml 供試液可等量分注多個平皿，傾注瓊脂培養基，混勻，凝固，培養，計數。每1ml 供試液所注的平皿中生長的菌數之和即為1ml的菌落數，計算每1ml 供試液的平均菌落數，按平皿法計數規則報告菌數；控制菌檢查時，可加大增菌培養基的用量。

　　② 離心沉淀法 取一定量的供試液， 500 轉/分離心3 分鐘，取全部上清液混合，用于細菌檢查。

　　③薄膜過濾法 見細菌、霉菌及酵母菌計數項下的“薄膜過濾法”。

　　④中和法 凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品，可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養基中。