麻痹性貝毒(PSP)是一類水溶性的神經毒素，其毒理與河豚毒素相似，主要通過對鈉離子通道的影響而抑制神經的傳導。麻痹性貝毒因其強烈毒性，經常造成消費者中毒死亡事件，并且具有廣布性與高發性。本方法建立了10種常見PSP毒素在貝、蟹等動物組織中的LC/MS/MS檢測方法。
麻痹性貝毒(PSP)是一類水溶性的神經毒素，主要來自有毒的渦鞭毛藻及具麻痹性貝毒的細菌，經食物鏈的網絡轉換與流動，不可逆地富集在可食性貝類體內，從而影響浮游動物、魚類、鳥類和海生哺乳動物，并造成毒害。近年來，麻痹性貝毒中毒事件時有發生，我國出口到日本的海產品屢次被檢測出麻痹性貝毒嚴重超標，麻痹性貝毒污染已嚴重危害我國公眾健康和貝類產業的發展。
麻痹性貝毒包括26個能導致神經毒性的天然化合物。其中石房蛤毒素( Saxitoxin，STX) 是PSP中最著名、毒性最強的毒素，其他化合物的毒性，均以STX毒性為基準值。
美國、歐盟規定水產品中PSP的法規限量為：毒性總和不高于STX 800 ppb。2005年，美國FAO、WHO和IOC聯合推薦PSP的法規限量為：毒性總和不高于STX 170 ppb（按每人消費250g貝類計算）。隨著PSP分析的進一步發展，法規限量的要求會更高。
本文建立了HILIC/ESI/MS/MS快速測定貝類和蟹中10種常見毒素的方法。由于PSP為堿性易溶于稀酸溶液的水溶性化合物，采用親水作用色譜柱（HILIC）具有很好地保留，并能將PSP的多個同質異形體很好地分離開來。本方法采用外標法，定量下限為20μg/kg，標準曲線范圍為20~1000μg/kg。
實驗條件
儀器與試劑
Surveyor HPLC液相色譜儀系統，配有Surveyor自動進樣器和LC Pump；TSQ Quantum Access三重四極桿串聯質譜儀，配有ESI源；標準品C1、C2、GTX2、GTX3、GTX1、GTX4、GTX5、STX、NeoSTX、dcSTX，純度高于90%；用1mol HCl溶解并配制成0.5mg/ml標準儲備液，并置于-20℃冷藏備用。除特殊說明外，所用試劑至少為分析級，乙腈為色譜純。
樣品制備
分別將貝類和蟹的軟組織取出，在冰水浴中攪碎、混勻，精密稱取5g，置于50ml離心管中，加入4℃含0.1%甲酸的乙腈/水（80：20，v/v）溶液10ml，在冰水浴中10000r/min勻質5min，3500r/min離心15min，上清液倒入50ml離心管中，于-20℃條件下放置4h，提取液分層，棄去上層溶液，取底層溶液3ml。
用PHEA固相萃取柱進行SPE凈化。依次用含0.1%甲酸的乙腈/水（10：90，v/v）溶液、含0.1%甲酸的乙腈/水（90：10，v/v）溶液各5ml活化固相萃取柱后，上樣，抽干，先用4℃含0.1％甲酸的乙腈/水（80：20，v/v）溶液3ml洗脫，然后再用4℃含0.1％甲酸的乙腈/水（10：90，v/v）溶液1 ml洗脫，收集該1ml洗脫液，過0.45μm濾膜，供LC/MS/MS法測定。
Accela U-HPLC液相色譜條件色譜柱：TSK-Gel Amide-80 column 250×2mm， 5μm (Tosoh Bioscience)；梯度洗脫和流速見表2，其中A：乙腈；B：0.02%甲酸、2mM甲酸銨水溶液；柱溫：30℃；進樣量：25μl。
TSQ Quantum Access質譜儀條件
電噴霧電離源（ESI），正離子模式；選擇反應監控（SRM）掃描模式，噴霧電壓：4500V；離子傳輸管溫度：300℃；氮氣作為鞘氣和輔助氣，其中鞘氣為35arb， 輔助氣為5arb，氬氣用作碰撞氣， 碰撞壓力為1.5mTorr； 選擇反應監測（SRM）離子對見表3，掃描寬度為0.002， 掃描時間為0.050ms。
結果與討論
本方法在貝類和蟹類中，C1、C2、GTX2、GTX3、GTX1、GTX4、GTX5、STX、NeoSTX、dcSTX的定量下限為20μg/kg，圖1為20μg/kg添加得到的典型LC/MS/MS色譜圖。其基本原理為：組織勻漿樣品用含0.1%甲酸的乙腈/水溶液提取，并沉淀蛋白，于-20℃條件下冷凍分層，取底部水層，過PHEA固相萃取柱凈化，串聯質譜（HILIC/ESI/MS/MS）法檢測。方法在貝和蟹中測定10種常見PSP毒素的平均提取回收率均應在40%以上，均滿足國內外的最低檢出限要求，并且定量定性準確，重現性好。
小結
本方法建立了10種常見PSP毒素在貝、蟹等動物組織中的LC/MS/MS檢測方法，10種常見毒素在定量下限20μg/kg的毒性相當于103.6μg/kg的STX。方法靈敏度、提取回收率、重現性等均滿足國內外監控和檢測要求。