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  • 發布時間:2020-07-06 16:38 原文鏈接: 總GLP1酶免試劑盒使用說明

    【預期用途】

    該高靈敏度ELISA(酶聯免疫吸附測定)試劑盒是專門用來定量檢測血漿樣本中的胰高血糖素樣肽-1(7-36)[GLP-1(1-36)]和(9-36)[GLP-1(9-36)]的總濃度。哺乳動物的GLP-1肽鏈的基本氨基酸序列完全相同,如:小鼠、大鼠、豬、狗、猴、人等。該試劑盒僅適用于科學研究。

     

    【實驗原理】

    該ELISA的設計,研發和生產的目的是對血清樣品中的活性GLP-1(7-36)和GLP-1(9-36)進行定量檢測。它是基于運用兩個GLP-1特異性抗體與兩個位點結合的“雙位點夾心”技術。

    將標準品、質控品、和待測樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中。隨后,將生物素偶聯的GLP-1特異抗體和HRP標記的GLP-1特異抗體混合物添加到各個孔中。經過第一個保溫孵育期,形成了“鏈霉親和素-生物素抗體- GLP-1(7-36)/(9-36)-HRP標記抗體”的“雙位點夾心”結構,該復合體被微孔板的內壁吸附住。游離的HRP標記抗體和緩沖基質則在洗滌過程中被沖走。微孔板加入過氧化物酶基質(3,3',5,5'-四甲基聯苯胺,TMB)并經過一段時間的反應后,然后用酶標儀測量吸光度。微孔板內壁的免疫復合體與GLP-1(7-36)/(9-36)的連接酶活性與樣本中的總GLP-1數量成正比。

     

    簡要實驗步驟

    • 在各指定孔中分別添加100μL標準品、質控品和病人樣本;

    • 在各孔中添加100μL抗體混合物;

    • 2-8℃靜置培養20-24小時;

    • 用洗滌緩沖液稀釋液洗凈條帶;

    • 在各孔中添加200 μL的TMB基質;

    • 室溫下靜置20分鐘;

    • 添加50 μL終止液;

    • 讀取450nm/620nm和450nm/650nm下的吸光度。


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