總RNA提取實驗——氯化鋰提取法

微生物動物細胞植物組織

氯化鋰尿素Tris-HCLEDTASDS

恒溫水浴冷凍高速離心機紫外分光光度計取液器電泳儀電泳槽

一、組織或細胞勻漿

1.  對于大量組織或細胞，則每克組織或細胞加入5~10 ml 氯化鋰-尿素溶液，勻漿器高速勻漿2分鐘。

2.  對于少量細胞（10⁷個細胞/ml），則每克組織或細胞加入0.5 ml 氯化鋰-尿素溶液手工勻漿，并轉移至Eppendof管中。

二、純化

1.  勻槳液在0~4℃放置4小時后，12 000 g 離心30分鐘。

2.  取沉淀，加入原勻槳液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液，重復步驟1。

3.  沉淀用原勻漿液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液復溶后，加入等體積酚/氯仿/異戊醇在室溫放置15~30分鐘并不時搖動混勻，4 000 g 離心5分鐘。

4.  取上層水相，加1/10倍體積的3 M 乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，-20℃放置1小時，5 000 g 離心。

5.  70%乙醇洗沉淀一次，真空干燥。

6.  RNA 溶解液溶解沉淀，得RNA 。

三、保存

分裝，于-70℃保存。