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  • 發布時間:2019-04-05 22:03 原文鏈接: 懸浮細胞在細胞培養瓶中的接種

    實驗方法原理淋巴樣細胞通常呈懸浮狀生長。常用的培養液為含 10%~15%FBS 的 RPMI1640 各種細胞系間最佳接種密度和平臺期細胞密度各不相同。當培養一種新的細胞系時其最佳原則為按 1:2 和 1:4 的比例傳代細胞,在 3~4 天時間內進行細胞計數以計算每毫升細胞數。細胞在傳代后 24~36 小時細胞數會翻倍。傳代細胞密度太低,細胞容易死亡,反映出細胞在達到增長前有較長滯留期。一旦細胞適應實驗室的培養條件冉決定備細胞株的最佳接種密度。細胞每毫升接種數量可從 5x104~8x105 不等培養液 PH 下降呈現黃色,表明細胞已達到最大密度需要進行換液或傳代培養。

    懸浮生長細胞傳代一般只需簡單稀釋操作即可,若需完全更換培養液只需低速離心沉淀,再懸于合適的培養液中即可。
    實驗材料

    淋巴樣細胞

    試劑、試劑盒

    含 10%~15%FBS 的 RPMI1640培養液

    儀器、耗材

    細胞培養瓶

    實驗步驟

    1、 如果細胞未在轉瓶中培養,只需搖晃、刮取或胰蛋白酶處埋(見下文&ldquo;胰蛋白酶處理分離細胞&rdquo;)即可將細胞從細胞瓶表面分離下來。

    2、輕輕地吹打細胞(移液管上下吹打),將細胞團吹散。

    3、取1ml 細胞懸液進行細胞計數,勿讓細胞沉積在瓶底。輕輕來回轉動細胞瓶使細胞處于懸浮狀態。

    4、稀釋細胞,使其終濃度約為每毫升 2x105~4x105

    5、進行細胞計數,并用臺盼藍排斥試驗進行細胞活力檢測,操作方案見下文&ldquo;細胞計數&rdquo;。

    展開 
    注意事項

    注意無菌操作,操作前用酒精擦拭雙手。

    其他

    懸浮細胞培養的優點:繁殖速度快、可以培養出齡期均一的細胞集團。

    來源《細胞實驗指南(上冊)》作者:黃培堂。


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