懸浮細胞一般幾天離心一次,覺得好難養啊!求心得?
丁香園網友goingba認為:你養的是什么細胞,原代嗎?我覺得懸浮細胞最好養了,不用消化,關于幾天離一次心,要看你的細胞生長狀態了,我養過血液腫瘤細胞,增值比較快,我一般是第二天半量換液(加等量培養基后一分二),第三天若長得比較滿,就離心換液。若你不想每天都去管它,你可以把細胞密度中的相對稀一點(不能太稀,太細了細胞不好好長),可以2-3天換一次液(半量,不用離心),這要看細胞狀態,和你試驗進度,若你急著用細胞,那就將細胞中密一點,天天換液,用胎牛血清,這樣細胞會瘋長的。要是比較嬌氣的細胞,象RPMI-8226,一定要用胎牛血清,2-3天半量換液,依據細胞狀態再離心換液,等細胞進入對數生長期了,養起來也就好養了。若是正常人T細胞,也要3-5天換一次液,最好3天的時候加入些新培養基,我曾經有一次1周忘了換液(因為T細胞增殖很慢,或者說在體外不給刺激基本不增殖,所以培養基的顏色不發生改變,但它也消耗營養),最后作流式發現細胞大部分凋亡和死亡了。
我養的是JURKAT,細胞狀態不太好,都給他吃20%胎牛血清了,聽說這細胞挺好樣,可能剛復蘇不好養,長得不好啊。
丁香園網友goingba認為:我倒沒養過你這株細胞,20%胎牛血清稍微有點高,剛復蘇出來細胞狀態不太好很正常,這是你換液不要太勤,你可以剛種的時候加的培養基少一點,往后幾天,每天加一點新鮮的進去。這個時候一點要注意你的培養的放置的時間,若在4度超過了2周,一定要加L-谷氨酰胺,我有一會就是剛開始細胞老是長的不太好,后來加了點谷氨酰胺,狀態立馬變了!也許我的細胞是趕巧了,馬上要好了正碰上我加谷氨酰胺,你的若實在長不好,也可以試一試!