實驗材料 病毒
試劑、試劑盒 無血清培養基脂質體胰酶含血清的培養基DMEM
儀器、耗材 EP管6孔板CO2培養箱高速離心機-80°C冰箱
實驗步驟
以六孔板中的1孔為例，每個樣品需要1×106個293T細胞。
1. 取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質粒和0.5μg表達質粒以及250μl的無血清培養基。輕柔混勻，室溫孵育5min。
2. 取1.5ml滅菌EP管，取9μl 脂質體2000l溶于250μl無血清培養基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。
3. 將DNA溶液和脂質體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min
4. 用胰酶消化并記數293T細胞。用含血清的培養基重懸細胞。
5. 在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生長培養基，再加入DNA-脂質體復合物。
6. 將1ml重懸的293T細胞（1×106個細胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育過夜。
7. 移除含有DNA-脂質體復合物的培養基移除，代之以DMEM（含丙酮酸鈉和非必須氨基酸）。
8. 轉染后48-72h收獲含病毒的上清。3000 rpm 離心20min，去除沉淀。
9. 病毒上清-80°C貯存。
包裝出來的慢病毒對NIH/3T3細胞達90%以上感染效率。