測序實驗流程:
掃描電鏡技術 掃描電鏡是用極細的電子束在樣品表面掃描,將產生的二次電子用特制的探測器收集,形成電信號運送到顯像管,在熒光屏上顯示物體。(細胞、組織)表面的立體構像,可攝制成照片。
掃描電鏡樣品用戊二醛和餓酸等固定,經脫水和臨界點干燥后,再于樣品表面噴鍍薄層金膜,以增加二波電子數。
電子顯微鏡下的纖維掃描電鏡能觀察較大的組織表面結構,由于它的景深長,1mm左右的凹凸不平面能清所成像,故放樣品圖像富有立體感。
掃描電鏡的主要特征如下:
(1)能夠直接觀察大尺寸試樣的原始表面;
(2)試樣在樣品室中的自由度非常大;
(3)觀察的視場大;
(4)圖像景深大,立體感強;
(5)對厚塊試樣可得到高分辨率圖像;
(6)輻照對試樣表面的污染小;
(7)能夠進行動態觀察(如動態拉伸、壓縮、彎曲、升降溫等);
(8)能獲得與形貌相對應的多方面信息;
(9)在不犧牲掃描電鏡特性的情況下擴充附加功能,如微區成分及晶體學分析。
掃描電子顯微鏡的主要結構
1.電子光學系統:電子槍;聚光鏡(*、第二聚光鏡和物鏡);物鏡光闌。
2.掃描系統:掃描信號發生器;掃描放大控制器;掃描偏轉線圈。
3.信號探測放大系統:探測二次電子、背散射電子等電子信號。
4.圖象顯示和記錄系統:早期SEM采用顯象管、照相機等。數字式SEM采用電腦系統進行圖象顯示和記錄管理。
5.真空系統:真空度高于 10 -4 Torr 。常用:機械真空泵、擴散泵、渦輪分子泵。
6.電源系統:高壓發生裝置、高壓油箱。
掃描電子顯微鏡,簡稱掃描電鏡、SEM可以應用于多個領域,例如:
(1)生物:種子、花粉、細菌……
(2)醫學:血球、病毒……
(3)動物:大腸、絨毛、細胞、纖維……
(4)材料:陶瓷、高分子、粉末、環氧樹脂……
(5)化學、物理、地質、冶金、礦物、污泥(桿菌) 、機械、電機及導電性樣品,如半導體(IC、線寬量測、斷面、結構觀察……)電子材料等。
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