實驗方法原理
實驗材料 病毒
試劑、試劑盒 無
儀器、耗材 掃描電鏡
實驗步驟
1. 標本的初步處理 待檢標本都具有柔軟而且含有大量水分的特點，在高度真空的掃描電鏡中觀察的標本都必須是干燥標本，因此，病毒標本在用掃描電鏡觀察之前都必須進行預處理并達到以下要求：
(1) 標本的預處理要求：①盡可能使標本的形貌和結構保持活體時的近似形態，以便能如實地反映標本本來面目改）②在盡可能減少標本變形的條件下，除去標本中的水分，以提高標本耐受電子束轟擊的能力，減少標本因電子束照射而發熱產生圖像飄移標本熔化和破裂的現象；③標本表面應有良好的導電性能和二次電子發射率，以減少和防止標本的荷電效應，提高圖像的分辨率。掃描電鏡標本的初步處理主要包括取材、表面清潔、固定、漂洗、脫水、干燥、噴金等過程。固定漂洗和脫水等步驟的處理方法基本上均沿用透射電鏡的生物標本制備方法，其中掃描電鏡標本處理的特殊要求如下。
(2) 標本處理的特殊要求：①由于掃描電鏡主要是二次電子圖像，觀察標本的外表形貌，其放大倍率變化范圍大，可從幾倍到兒十萬倍，標本室相應的也大得多，因此可以觀察較大的標本，生物組織一般可取 8~10mm2 左右，厚度可達 5mm; ②掃描電鏡要觀察的是一個結構完整而無雜物的清潔表面，但是許多生物標本的表面常附有粘液、血液、組織液及灰塵等雜物會妨礙觀察，掩蓋組織結構，以致造成對圖像的錯誤解釋，故在固定前必須采取相應的方法清潔標本表面。一般可用生理鹽水或緩沖液清洗，也可用超聲波或乳酸溶液清洗。
2. 標本的干燥 標本均要經過干燥處理后方能鍍金進行掃描電鏡觀察。但多數柔軟的組織，在干燥時要發生明顯的塌陷和畸變。由于組織對應力的耐受性不同，以及組織被固定的程度不同，標本表面的畸變亦不相同，大致有以下幾種：①自然干燥引起的收縮；②組織的部分收縮引起小的和微小的龜裂；③以組織中的細胞為中心的收縮而引起細胞間的龜裂; ④由于表面張力而引起纖毛、菌毛、微絨毛等微細結構的凝集和收縮。因此，干燥過程是制樣中最關鍵的一步。目前常用的干燥方法主要有空氣干燥法、臨界點干燥法、冰凍干燥法和真空于燥法，其中以臨界點干燥法為佳。