實驗方法原理 當處理許多 RNA 樣品或處理小量的哺乳動物總 RNA 時（<50 μg)，可選擇用 oligo (dT) —纖維素進行批量層析的方法。這種方法采用級別較好的 oligo (dT) —纖維素，在最佳溫度進行結合和洗滌。多年來發表了許多純化 poly (A)+ RNA 的批量層析方法。
實驗材料 總 RNA
試劑、試劑盒 吸附 洗滌緩沖液醋酸銨乙醇冰預冷的水NaClTES
儀器、耗材 比色杯微量離心機Oligo (dT)18-30—纖維素旋轉輪水浴
實驗步驟
一、材料
1. 緩沖液和溶液
吸附/洗滌緩沖液（含 0.5 mol/L NaCl 的 TES 緩沖液）
醋酸銨（10 mol/L）
乙醇
冰預冷的水
NaCl（5 mol/L）
TES
2. 核酸和寡核苷酸
總 RNA
3. 專用設備
用于測量 260 nm 吸光值的比色杯
有速度控制的微量離心機
Oligo (dT)18-30—纖維素
旋轉輪
55℃ 和 65℃ 的水浴
二、方法
1. 在一系列滅菌微量離心管中，將每份總 RNA ( 上限為 1 mg ) 樣品的體積用 TES 調整到 600 μl。封好管口，在 65℃ 加熱 10 min，然后迅速在冰上冷卻到 0℃ 。每份樣品加 75 μl ( 0.1 倍體積）5 mol/L NaCl。
2. 在每管中加 50 mg ( 500 μl) 平衡的 oligo (dT)—纖維素，蓋好管蓋，室溫下在旋轉輪上溫育 15 min。
3. 用微量離心機在室溫下離心，600~800 g ( 約 1500~2500 r/min)，2 min。
4. 將上清移到一系列干凈的離心管中，置冰上存放。
5. 在含 oligo (dT) 的沉淀中加 1 ml 冰預冷的吸附/洗滌緩沖液。溫和旋渦震蕩分散沉淀。將蓋好蓋子的離心管置于旋轉輪上，室溫下溫育 2 min。
6. 室溫下，用微量離心機離心，600~800 g ( 約 1500~2500 r/min), 2 min。棄上清。 重復步驟 5 和 6 兩次。
7. 在含 oligo(dT) 的沉淀中加 0.4 ml 冰預冷的雙蒸滅菌水，溫和旋渦震蕩以重懸沉淀。立即在微離心機上離心，4℃，2 min。
8. 小心吸去上清。
9. 回收結合的 poly(A)+ RNA：用 400 μl 雙蒸滅菌水重懸沉淀，在 55℃ 溫育 5 min，然后 4℃ 離心 2 min。
10. 將上清移至一系列干凈的離心管中，重復步驟 9 兩次，合并所有上清。
11. 在上清中加 0.2 倍體積的 10 mol/L 醋酸銨和 2.5 倍體積的乙醇，在 -20℃ 存放 30 min。
12. 回收沉淀的 poly (A)+ RNA： 4℃ 離心，最大速度，15 min。小心棄上清，用 70% 乙醇洗沉淀，短暫離心，吸去上清，將管蓋打開，倒置數分鐘，使大部分殘留的乙醇揮發。
13. 用小體積滅菌的 DEPC 處理的水溶解 RNA。
14. 估計 RNA 濃度。
15. 保存樣品。