如今,單克隆抗體藥物以其獨特的作用機制及高效性,在腫瘤和自身免疫疾病的治療中發揮了不可估量的作用,成為全球的研發熱點，目前已有2400個單克隆抗體藥物處于研發及商業化階段。
1975年雜交瘤技術問世[1]。1986年鼠源單克隆抗體藥物Muromonab的上市拉開了單克隆抗體發展的序幕。隨后的50年，單克隆抗體藥物經歷了嵌合抗體-人源化抗體--全人源抗體四個階段，產生了抗體偶聯藥物、抗體融合蛋白、單域抗體等多種新型抗體藥物，標志著免疫療法黃金時代的開啟[2]。單克隆抗體藥物的推陳出新歸根于單克隆抗體技術的不斷發展與創新。目前應用的抗體技術有：雜交瘤技術、噬菌體展示技術、天然全人源庫技術和單個B細胞技術。
單個B細胞抗體制備技術原理
單個B細胞技術[3]是近年來新發展的一類快速制備單克隆抗體的技術，是根據每一個B細胞只含有一個功能性重鏈可變區DNA序列和一個輕鏈可變區DNA序列，以及每一個B細胞只產生一種特異性抗體的特性，從免疫動物組織或外周血中分離抗原特異性B細胞，通過單細胞PCR技術從單個抗體分泌B細胞中擴增IgG重鏈和輕鏈可變區基因，然后在哺乳動物細胞內表達獲得具有生物活性的單克隆抗體。這種方法保留了重鏈和輕鏈可變區的天然配對，具有基因多樣性好、效率高、全天然源性的特點，也成為了目前快速開發針對抗病毒感染性疾病抗體的重要策略。
單個B細胞抗體制備過程
圖1 單個B淋巴細胞抗體制備過程[4]
1. 鑒定和分離單個B細胞
1）溶血斑塊技術分選B細胞
溶血斑塊技術原理[5]是抗原與抗體反應后，在補體作用下能使紅細胞裂解形成溶血斑塊，進而通過顯微技術篩選和分離抗原特異性B細胞。該方法有點：方便、快捷、特異性好；缺點：紅細胞容易受到溫度、滲透壓、酶等多方面影響，且溶血斑塊技術分離的B細胞往往不能進行高通量分析和活細胞增殖。
圖2 克隆單細胞免疫球蛋白VH和VLcDNAs產生特異性抗體的策略[5]
2）MACS法（磁珠分選法)分選B細胞
原理是基于抗原抗體結合的特異性，B細胞表面分子與包被有特異性抗體的磁珠相結合，形成表面分子-抗體-磁珠復合物，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，不能與特異性抗體相結合的細胞由于沒有吸附磁珠，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離[6]。該方法優點：操作簡單、穩定、重復性好；缺點：用到的抗體種類較多、對磁珠與磁珠柱的質量要求較高、費用較高。該方法可以和其它分離方法配合使用。
圖3 磁珠分選法原理圖[6]