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  • 發布時間:2019-04-11 17:26 原文鏈接: 技術和方案25測定鋪板效率

    實驗步驟

    菌株的鋪板效率是以培養基中可形成菌落的活力細胞的百分比衡量的(有時也稱為克隆形成單位或 cfu)。測定鋪板效率有以下兩種簡便的方法。

    間接法

    1.測定培養物中的細胞密度,用 Coulter 計數儀測定培養物光密度或用血球計數板統計細胞個數。

    2.確定要將細胞稀釋至 103 個/ml 所需要的稀釋系數。超聲波處理細胞以便將菌塊分散并按此稀釋度將細胞稀釋于蒸餾水中。

    3.取 0.2 ml 稀釋液涂布于 YPD 平板上,在所需溫度下培養數天,計數菌落數目。將菌落數除以 200 即得到鋪板效率,以小數表示(如 100 個克隆的鋪板效率是 0.5)。

    直接法

    1.取細胞密度為 106~107 個/ml 的培養物,超聲波處理分散細胞。

    2.涂布 0.2 ml 細胞懸液于 YPD 平板上,待液體干燥。

    3.在所需溫度下培養 16~24 h。

    4.在四分體解剖顯微鏡下觀察平板表面,有繁殖力的細胞將形成包含 50~100 個細胞的圓形微菌落,無繁殖力的細胞不會形成菌落但可形成由 1~10 個細胞組成的不規則集合。由此直接計算有繁殖力的細胞與無繁殖力的細胞數進而確定鋪板效率。

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