原理:
抗人球蛋白試驗 (antiglobulin test,A GT),又稱 Coombs 試驗,是檢查不完全抗體的 一種很好方法。用人血清免疫家兔,產生抗人球蛋白抗體,即抗人球蛋白血清。將抗人球蛋白血清。
(AGS) 加入已經致敏的紅細胞鹽水懸液中,紅細胞表面的抗體球蛋白 (即使其致敏的 不完全抗體) 與抗球蛋白血清中的抗體發生特異性反應。使紅細胞發生凝集。本試驗可 分為直接法和間接法兩種。
(二) 間接抗球蛋白試驗
本試驗是一種檢測血清中不完全血型抗體的方法。即用已知抗原的紅細胞測定受檢 血清中相應的不完全抗體,或用已知抗血清測定受檢紅細胞上相應抗原。此法可用于鑒 定血型和檢查血清中不完全抗體、輸血前交叉配血試驗及其他特殊研究。
1.試劑和材料
(1) 抗人球蛋白血清
(2) 受檢血清 (或已知抗體的血清)
(3)5 %已知抗原的紅細胞懸液 (或5 %受檢紅細胞懸液)
(4) 不完全抗D 血清
(5) AB 型血清
(6)5 %陽性紅細胞懸液
2.方法
(1) 取試管3 支,標明受檢管、陽性對照及陰性對照。
(3) 混勻,置37 ℃水浴1 小時,用生理鹽水洗滌3 次。末次洗滌后,將上清液除盡,并用濾紙將附著于管口的鹽水吸去,每管各留紅細胞懸液1 滴。
(4) 每管各加適當濃度抗人球蛋白血清1 滴,混勻,以1000r/min 離心1min ,觀察 結果。
(5) 結果判定。陽性對照管凝集,陰性對照管不凝集,受檢管出現凝集者為陽性, 表示受檢血清中有不完全抗體 (或受檢紅細胞上有相應抗原),如陽性或陰性對照出現 不規則結果應分析原因。
(6) 效價滴定。如受檢血清中檢出有不完全抗體,可將受檢血清以鹽水作倍量稀釋 后,按上法進行測定。
3.注意事項
(1) 血清與相應紅細胞在37 ℃水浴中致敏的時間經研究發現,如致敏1 小時,75 % 的抗體吸附于紅細胞上,如致敏時間延長達2 小時,抗體吸附達95 %;如以低離子強 度鹽水溶液 (LISS) 代替生理鹽水配制5 %紅細胞懸液,則致敏時間可減少,大多數抗 體經致敏15 ~30min 即可,但抗Fy 和抗Jk 抗體需較長的孵育時間。
(2) 紅細胞洗滌應迅速,不應當中斷停止,洗滌用鹽水要足量,并用力沖入管底, 使壓積于管底的細胞分離。切勿用手指堵住管口,顛倒混勻,以防污染來自皮膚的蛋 白。
(3) 離心速度和時間十分重要,應按規定進行。原則上應以最小的離心力和最短的 離心時間能使陽性對照管出現陽性反應為宜。
4.臨床意義
(1) 抗人球蛋白試驗的直接法在臨床上主要是檢查被檢者紅細胞表面是否結合有不 完全抗體,如新生兒溶血病病兒的紅細胞被母體不完全抗體致敏;溶血性 (血管外) 輸 血反應時,獻血者紅細胞被受血者體內不完全抗體致敏;以及自身免疫性溶血性貧血病 人紅細胞被自身抗體致敏等。在臨床上有較大意義。
(2) 抗人球蛋白試驗的間接法是用已知抗原的紅細胞檢查被檢者血清中的不完全抗 體,也可用已知抗血清測定被檢紅細胞是否含有相應抗原。在臨床上此法可用于血型鑒 定 (如 D U 、Daffy 、Kidd 等),抗體的檢出和鑒定。尚有助于D 的檢出,凡酶介質或其他 方法為 “d” 紅細胞,必須用本法證實。