抗原修復鍋的使用方法

免疫組織化學方法成功與否關鍵在于抗原決定簇的保存和暴露.組織經甲醛固定.甲醛的醛基與抗原蛋白的氨基交聯,使決定簇的構像改變.從而影響檢測蛋白表達.要充分暴露抗原決定簇，通常用到抗原修復鍋Antigen Retriever。強烈推薦EMS最具有競爭力的一款產品，適于甲醛固定的組織，經石蠟包埋后進行免疫染色前的處理，配合特別的抗原修復緩沖液確保你得到最搞質量的免疫染色效果。

· 一次可以在6中不同緩沖液中運行，進行抗原暴露

· 僅暴露抗原決定簇，不損傷組織的形態

· 實驗結果穩定，結果重現性高

· 系列的玻片在獨立環境中經過處理

抗原修復鍋怎樣工作？

看上去，抗原修復鍋似我們烹飪的高壓鍋。這是一款功能獨特的“高壓鍋”，主要用于抗原暴露的工作，主要的工作原理也是裝玻片的幾個分室可以達到高溫(>120°C)高壓。靈敏的傳感控制器來保持一定的溫度和壓力及一定的時間，這些工作參數都是經過嚴格的科學實驗得到的數據。當達到需要的溫度，抗原修復鍋會在該溫度下保持幾分鐘，之后鍋內玻片被冷卻2個多小時，特殊設材質的內鍋體控制了鍋和玻片的冷卻速度。 

誰是受益人？

研究病理的實驗室，那里需要高質量染色照片（用來發表）的

缺乏技術人員的實驗室，學生和博士后均可以處理玻片進行組織染色，且不需要很多時間來摸索

小型病理實驗室，每天處理的玻片數量有限

樣本昂貴稀有，或如組織芯片，或如獨一無二的組織樣本，利用抗原修復鍋，簡單可靠

怎樣選擇一種緩沖液（Buffer）？

如果你已經知道哪種緩沖液用在微波的某種組織抗原修復，那么用抗原修復鍋時，這種緩沖液也同時適用的機會很大。我們提供四種即用型緩沖液R-Buffer A/B/C/U，同時也提供同種更加溫和的組織處理緩沖液，我們稱之G系列，R-Buffer AG/BG/CG/UG。

選擇Buffer，主要考慮以下兩點：

1. 抗原的自然特性以及所選擇的抗體

抗原自身特性和抗原的位置都是首要考慮。我們建議你剛開始的時候選擇抗原表達環境的最適Buffer。以下是經驗供大家參考：

Most of the nuclear antigens (apoptosis-related, survival-related, proliferation-related) R: Buffer A (or AG).

Cell adhesion molecules, cell membrane antigens (extracellular domain) R: Buffer A (or AG)

Cytoskeleton and cytoskeleton-associated molecules – R:Buffer A (or AG)

Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer B (or BG)

Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer C (or CG)

Most of antibodies raised against a linear peptide – R: Buffer U (or UG)

2.  固定液以及固定程度

建議的組織切片的抗原修復處理是一種針對普通的適化狀態切片。如果用來切片的組織塊沒有充分固定，或者過固定（留在福爾馬林溶液中時間過長），或者用了其它的固定液，那么，處理組織切片的流程方案需要重新修訂，最便利的辦法是選擇使用G系列緩沖液。對于過固定的材料一般推薦用U buffer或者在同一Buffer里面增加循環

抗原修復鍋技術參數：

使用抗原修復鍋進行染色的效果示例

1.福爾馬林固定，石蠟包埋，人乙狀結腸組織切片，經抗原修復鍋進行抗原暴露，R-Buffer C (pH 6.0)組織玻片降溫過夜，抗體MIB-1，抗原Ki-67，R-Detect HRP系統染色

2. 福爾馬林固定，石蠟包埋，人乙狀結腸組織切片，經抗原修復鍋進行抗原暴露，R-Buffer A (pH 8.1)組織玻片降溫過夜，抗體#4B11，抗原CD8 (cell membrane)，R-Detect HRP系統染色.

儀器及配件的選購：

緩沖液的選購：