鏈球菌溶血素O對氧不穩定,在空氣中迅速失去溶血活力,檢測ASO時,先將鏈球菌溶血素O還原,恢復其溶血活力,再與不同稀釋度的病人血清混合,繼加O型紅細胞或兔紅細胞懸液作為指示劑。如溶血素O被血清中的相應抗體所中和,則加入的指示紅細胞不被溶解。如血清中無相應抗體或抗體量不足以中和加入的溶血素,則發生不同程度的溶血現象。