抗血清中去除交叉反應性抗體實驗

試劑、試劑盒 封閉緩沖液封閉液細胞懸浮緩沖液抗體LB 培養基

儀器、耗材 Sorval GSA 轉子或相當轉子適用于處理細菌的超聲波破碎儀大腸桿菌 Y1090 hsdR

實驗步驟

材料

緩沖液和溶液

貯存緩沖液和試劑的組分請見時錄 12。

將貯存液稀釋到適當的濃度。

封閉緩沖液

10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

150 mmol/L NaCl

0.05%(V/V)Tween-20

封閉液（1%m/V 明膠,3%m/V 牛血清白蛋白，或 5%m/V 脫脂奶粉）

這些封閉試劑的優點，不同實驗室備執一詞。我們建議使用者進行預試驗確定哪種封閉液與所選擇的第一抗體和第二抗體匹配最優。封閉液可以貯存于 4°C，重復使用數次。加人終濃度為 0.05%(m/V）的疊氮化鈉用以抑制微生物的生長。

細胞懸浮緩沖液

50 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

10 mmol/L EDTA(pH8.0)

過濾除菌，以 50 ml 等分后貯存于 4°C。

抗體

制備用于文庫篩選的抗體

培養基

LB 培養基

離心機和轉子

Sorval GSA 轉子或相當轉子

專用設備

適用于處理細菌的超聲波破碎儀

載體和菌株

大腸桿菌 Y1090 hsdR

該菌株可以從 Stratagene,Life Technologies 或 ATCC(www，atcc.org) 獲得。

方法

1. 在 LB 培養基中培養 100 ml 大腸桿菌 Y1090 hsdR 株達到飽和。

2. 于 4°C 以 5000 g 離心10min 收獲細菌。

3. 細菌重懸于 3 ml 細菌懸浮緩沖液中。反復凍融數次，再于 0°C 用最大功率超聲波處理 6 次，每次 20s。

4. 提取液于 4°C 以 12000g 離心 10 min, 將上清液轉移到另一試管內，所得裂解液貯存于-20°C。

5. 使用裂解液前先用封閉液以 1:10 稀釋用于篩選的抗體制劑。

6. 每毫升抗血清中加入 0.5 ml 大腸桿菌裂解液。置室溫緩慢搖動溫育 4 h。處理后的抗體加入 0.05% 疊氮化鈉，保存于 4°C 以備免疫篩選時使用。